[发明专利]多粘菌素轭合物

说明书

发明的概述

本发明涉及生产多粘菌素B(PMB)或其盐与葡聚糖的水溶性轭合物(或其盐)的方法、该方法包括在pH9.3左右-10左右(优选约9.5～约9.7)的含水介质中，于约30°-约35℃(优选约32℃)温度下，将多粘菌素B或其盐与葡聚糖反应。一种优选的不同方法是在约32℃温度下，使硫酸多粘菌素B与氧化葡聚糖反应，通过胺键，该多粘菌素B分子与葡聚糖共价连接。本发明方法制备的此种改进轭合物(或其盐)、可容易而又恒定地进行复制，且药理学特性得到明显改善，例如效力更高，其抗内毒素活性也高于非轭合多粘菌素B的抗内毒性活性。

本发明也包括含有多粘菌素B或其盐与葡聚糖的水溶性轭合物、比非轭合多粘菌素B具较强抗内毒素活性的轭合物(或其盐)。发明的技术背景

对于有效治疗系统性炎性反应综合症(SIRS)及脓毒休克的医药需求，已引起广泛关注，该病患者基数大，在发达国家需要紧急治疗的SIRS脓毒症严重病例超过100000例，而有几乎1百万患者处于脓毒症高危险状况，要通过预防措施使其解脱。

根据大量人和动物解体的研究，认识到内毒素在SIRS/脓毒症发病机理中是主要诱因和基本媒介，因此为抗内毒素探讨脓毒症提供一个明确的科学原理。内毒素或脂多糖是Gram氏阴性细菌衍生出的结构分子，当进入血液中时，它们可能影响体温调节，引起发烧。它们也产生毒效应，导致心脏、肺及肾脏衰竭。在加护病房患者中，内毒素相关疾病是死亡的主要原因。

PMB中和内毒素的能力在抗生素中是很独特的，它通过结合于内毒素分子的脂A区来完成，来自多粘杆菌(B，硫酸多粘菌)的PMB是高载荷的两亲环肽脂，它也可用于消除各种真菌感染，特别是免疫功能遭致损害的个体中出现的感染。然而，PMB也有某些使它不如理想抗生素之性质。第一，它在体内的半衷期很短，为了产生效果，需重复剂量；第二，当其通过肾脏时可能会引起严重损伤；第三，高剂量时，具神经毒性、会引起呼吸麻痹。

以前，有科研人员将PMB与不流动或固定分子轭合，例如Issekutz，J.Immunol.Methods 61(1983)275-281，描述了将PMB与琼脂糖结合。而这些轭合物只用于提纯工艺，并不适宜于体内治疗用。

为赋予药理学活性，延长持续时间，或降低器官毒性，已经采用的一个方法是将药物与高分子量大分子，例如葡聚糖，聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷等轭合。但是，在这一高聚物轭合领域里的嗜试，仅仅取得了有限的成功。例如，普鲁卡因酰胺(抗心律失常药)的轭合形式活性较低，且比原鲁便卡因酰胺半衰期更短(Schact等人，Ann N.Y.，Acad.  Sci.416[1985]199-211)。同样，连接于载体上的前列腺素类似物B245，比原分子效果也降低了(降低幅度为几个数量级)(Bamford等人，Bioch Biophys.Acta 886[1986]109-118)。有关激肽释放酶、抑肽酶、缓激肽(Odya等人，Biochem.Pharmacol.27.[1978]173-179)、抗肿瘤药物正定霉素(Hurwitz等人，J.Appl.Biochem.2[1980]25-35)和丝裂霉素C(Takakura等人，Cancer Res.44[1984]2505-2510)的轭合形式，其生物学效力降低也已被披露过，轭合酶也因其空间障碍使得底物不易接近而降低了生物活性(Blomhoff等人，Biochem.Biophys.Acta 757[1983]202-208；Marshall等人，J.Biol.Chem.251(4)[1976]1081-1087；R.L.Foster，Experimentia 31(7)[1975]772-773；Wileman等人，J.Pharm.Pharmacol.35[1983]762-765)。但也有轭合之后循环半衷期得到改善的一些例子(Wileman前述文献；Kaneo，Chem.Pharn.Bull.37(1)[1989]218-220)。

人们企盼开发出一种能在血液中停留较长时间，和/或以治疗剂量施用不具神经毒性或肾毒性的PMB类型。USP 5177059及其在其它国家的相同专利、如EP 428486，介绍了多粘菌素B与多糖(如葡聚糖或羟乙基淀粉)、蛋白(如白蛋白)、及高聚物(如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、和聚乙烯醇)轭合。该专利还详细描述了多粘菌素B与葡聚糖化学轭合的方法，即将原料于室温(即25°左右或更低)，pH8.5-9.0条件下反应。该专利所述轭合物比未轭合多粘菌素B的毒性小，并有抗内毒素活性，该活性虽未清楚定义，但看来与未轭合多粘菌素B相等或较小。