[发明专利]大肠杆菌表达制备具诱骨活性的人骨形成蛋白-3无效
| 申请号： | 96118679.8 | 申请日： | 1996-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN1165189A | 公开（公告）日： | 1997-11-19 |
| 发明（设计）人： | 陈苏民;刘新平;薄勤;卢兹凡;陈南春 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P21/02;C07K14/51;C07K1/14 |
| 代理公司： | 西北地区军队院校专利事务所 | 代理人： | 秦红 |
| 地址： | 710032 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 表达 制备 具诱骨 活性 形成 蛋白 | ||
【权利要求书】：
1 大肠杆菌表达制备具诱骨活性的人骨形成蛋白-3(hBMP-3)，其特征在于：1).构建了原核双顺反子表达载体pEC和pGC；2).利用PCR方法获取所需的hBMP-3基因全序列或部分序列；3).在大肠杆菌表达系统中高表达了hBMP-3不同长度的肽段；4).通过包涵体的纯化、变性、复性获取有活性的骨形成蛋白-3；5).骨形成蛋白-3单独或通过与复合材料复合后进行诱骨活性测定。
2 根据权利要求1所述的hBMP-3，其特征在于：所用的原核双顺反子表达载体pEC和pGC，分别以era和gst基因为第一顺反子，分别以PL和Ptac为启动子，同时引入”原核翻译增强子”序列构建而成。
3 根据权利要求1和2所述的hBMP-3，其特征在于：所述的骨形成蛋白-3包括其全序列、部分序列、突变体以及与其它目的基因的融合体。
4 根据权利要求3所述的hBMP-3，其特征在于：采用简便易行的骨形成蛋白包涵体纯化和复性工艺，首先洗涤菌体，加入裂解液(STE，Triton X-100，NaCl等)裂菌，用Triton X-100、脲等包涵体洗涤液洗涤粗制包涵体，得纯化的包涵体。将纯化的包涵体用包涵体变性液(脲，Tris.Cl，等)进行变性，离心除去不溶物，对复性液进行透析，最后冷冻真空干燥。用离体或整体动物实验证明其具有诱骨活性。
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