[发明专利]2－酮－L－古洛糖酸的生产方法

权利要求书

1．一种表达载体，包括编码L-山梨糖脱氢酶的DNA及编码L-山梨糖醛酮脱氢酶的DNA。

2．权利要求1中的表达载体，其中编码L-山梨糖脱氢酶的DNA及编码L-山梨糖醛酮脱氢酶的DNA的构建是使得转录可由一个启动子下相继发生，或者每一个DNA的转录在不同的启动子控制下发生。

3．权利要求1或2中的表达载体，其中启动子是L-山梨糖醛酮脱氢酶基因的启动子区域或其中有启动子活性的部分。

4．权利要求1或2中的表达载体，其中启动子源自大肠杆菌。

5．权利要求1或2中的表达载体，其中启动子为大肠杆菌启动子tufB,λPL,trp或tac。

6．权利要求1的表达载体，其适用于转化能由D-山梨糖醇高产L-山梨糖的、没有或仅有低的2-酮-L-古洛糖酸降解活性的宿主微生物。

7．权利要求1的表达载体，其适用于转化能由D-山梨糖醇高产L-山梨糖的、没有或仅有低的2-酮-L-古洛糖酸降解活性，没有或仅有低的L-艾杜糖酸产出活性的宿主微生物。

8．权利要求1的表达载体，其中编码L-山梨糖脱氢酶的DNA及编码L-山梨糖醛酮脱氢酶的DNA是编码源自氧化葡糖杆菌T-100的所述酶类的DNA。

9．权利要求1的表达载体，其中编码L-山梨糖脱氢酶的DNA及编码L-山梨糖醛酮脱氢酶的DNA所编码的酶分别具有序列表中SQ:IDNo.1及SQ:ID No.2描述的氨基酸序列。

10．权利要求1的表达载体，其中编码L-山梨糖脱氢酶的DNA及编码L-山梨糖醛酮的DNA分别具有序列表中SQ:ID No.3及SQ:IDNo.4中的核苷酸序列。

11．一种用权利要求1的表达载体转化宿主细胞而得到的可由D-山梨糖醇生产2-酮-L-古洛糖酸的转化体，其中宿主微生物可以由D-山梨糖高产L-山梨糖，并且没有或仅有低的2-酮-L-古洛糖酸降解活性。

12．一种用含有编码L-山梨糖脱氢酶的DNA的表达载体和含有编码L-山梨糖醛酮脱氢酶的DNA的表达载体转化宿主细胞而得到的转化体，该转化体可由D-山梨糖醇生产2-酮-L-古洛糖酸，其中宿主微生物可以由D-山梨糖醇高产L-山梨糖，并且没有或仅有低的2-酮-L-古洛糖酸降解活性。

13．一种用权利要求1的表达载体转化宿主细胞而得到的可由D-山梨糖醇生产2-酮-L-古洛糖酸的转化体，其中宿主微生物可以由D-山梨糖高产L-山梨糖，并且没有或仅有低的2-酮-L-古洛糖酸降解活性以及没有或仅有低的艾杜酸生产活性。

14．一种用含有编码L-山梨糖脱氢酶的DNA的表达载体和含有编码L-山梨糖醛酮脱氢酶的DNA的表达载体转化宿主细胞而得到的转化体，该转化体可由D-山梨糖醇生产2-酮-L-古洛糖酸，其中宿主微生物可以由D-山梨糖醇高产L-山梨糖，并且没有或仅有低的2-酮-L-古洛糖酸降解活性以及没有或仅有低的L-艾杜酸生产活性。

15．生产2-酮-L-古洛糖酸的方法，包括在含有D-山梨糖醇的培养基中培养权利要求11至14中任一项的转化体，并由得到的培养物获得2-酮-L-古洛糖酸。