[发明专利]利用自体裂解融合蛋白质的表达系统及新的还原多肽

权利要求书

1.一种多核苷酸序列，它编码一种融合蛋白，并且沿5′到3′的方向在同一开放阅读框架中含有：

a)编码三叶草黄色叶脉病毒核包涵体a蛋白或与三叶草黄色叶脉病毒核包涵体a蛋白质具有相似蛋白水解特异性的突变体或变异体的序列；

b)编码裂解肽Asn Cys Ser Phe Gln X的序列，其中X是任何氨基酸残基；

c)至少一种编码某多肽的序列。

2.根据权利要求1的多核苷酸序列，它是DNA。

3.根据权利要求1的多核苷酸序列，它是双链形式的。

4.一种与权利要求1的多核苷酸序列相对应的反义多核苷酸序列。

5.根据权利要求1的多核苷酸序列，其中c)的序列编码一种以上的多肽，并且还编码每个被编码多肽之间的其他裂解序列。

6.根据权利要求5的多核苷酸序列，其中所述的其他裂解序列能被三叶草黄色叶脉病毒核包涵体a识别。

7.根据权利要求1的多核苷酸序列，其中c)的序列只编码一种多肽。

8.根据权利要求1的多核苷酸序列，其中b)的序列整个或部分地包括在序列a)和c)之一或两者之中。

9.根据权利要求1的多核苷酸序列，其中在由b)的序列编码的裂解肽和由c)的序列编码的多肽之间编码一个或多个氨基酸残基。

10.根据权利要求1的多核苷酸序列，其中由a)的序列编码的核包涵体a蛋白质对被编码的融合蛋白质的裂解产生一种多肽，该多肽具有一个附加的N末端氨基酸序列，其中末端残基是甘氨酸、丝氨酸或丙氨酸残基。

11.根据权利要求10的多核苷酸序列，其中所述的甘氨酸、丝氨酸或丙氨酸残基可由适当的氨基肽酶的作用而除去。

12.根据权利要求1的多核苷酸序列，其中在多肽N末端和裂解肽C末端之间编码一脯氨酸残基。

13.根据权利要求12的多核苷酸序列，其中延伸到脯氨酸残基之后的任何残基均可由氨基肽酶P(3.4.11.9)的作用而切除。

14.根据权利要求13的多核苷酸序列，其中在切割到脯氨酸残基之后，可通过脯氨酸亚氨基肽酶(3.4.11.15)的作用将脯氨酸残基除去。

15.根据权利要求1的多核苷酸序列，其中在多肽N末端和裂解肽的C末端之间编码一丙氨酸残基。

16.根据权利要求15的多核苷酸序列，其中延伸到丙氨酸残基之后的任何残基均可由氨基肽酶P(3.4.11.9)的作用而切除，并且可由丙氨酸氨基肽酶(3.4.11.14)的催化作用切除丙氨酸残基。

17.根据权利要求8的多核苷酸序列，其中b)的序列被完全包含在a)和c)的序列之中。

18.根据权利要求1的多核苷酸序列，其中a)的序列是由序列表中序列ID No.1的10-1311号核苷酸给出的。

19.根据权利要求1的多核苷酸序列，其中a)的序列编码由序列表中序列ID No.2的4至437号氨基酸给出的多肽。

20.根据权利要求1的多核苷酸序列，该序列在序列a)的上游还编码一个前导序列。

21.一种含有前述任一项权利要求的多核苷酸序列的载体。

22.根据权利要求21的载体，它是一种表达载体。

23.一种用权利要求21的载体转化的宿主。

24.一种由权利要求1的多核苷酸序列编码的融合蛋白质。

25.根据权利要求1的多核苷酸序列，其中该序列如序列IDNo.12所定义。

26.一种由权利要求25的多核苷酸序列编码的融合蛋白质。