[发明专利]从分枝层壁菌制备环胞多肽A的方法

权利要求书

1)一种从分枝层壁菌某种(Tolypocladium sp.)制备环胞多肽A的方法，其包括：把上述分枝层壁菌在—营养培养基中发酵而得到—发酵培养基，用甲醇提取上述发酵培养基中的真菌生物量而得到—甲醇提取液，通过蒸发步骤从上述提取液中去除甲醇而得到第一种残余物，制备上述第一种残余物的水溶液，制备该水溶液的乙酸乙酯提取液，将上述提取液脱色并浓缩而得到第二种残余物，然后分二步对其进行层析法纯化，即第一步以硅胶柱为固相，以己烷、氯仿和甲醇混合溶剂为移动相，第二步以树脂柱为固相而以甲醇为移动相。

2)根据权利要求1的方法，其中发酵步骤以静态发酵进行。

3)根据权利要求1的方法，其中发酵步骤以固体底物发酵进行。

4)根据权利要求1的方法，其中接种到营养培养基中的上述分枝层壁菌某菌种为主种子。

5)根据权利要求4的方法，培养基中含有上述分枝层壁菌某菌种悬浮孢子，培养基成分为葡萄糖、胨、酪蛋白酸水解物和无菌水，PH值维持在4-6之间，把—匙该菌种孢子悬浮液接种到琼脂斜面培养基中，该斜面培养基含麦芽汁、酵母膏和琼脂，PH值为4-6，对琼脂斜面培养基进行培养直到培养物中形成孢子，这样来得到主种子。

6)根据权利要求1的方法，其包括形成该菌种之种菌的步骤，而接种到发酵培养基中至少有两种阶段。

7)根据权利要求6的方法，其中上述第一阶段步骤包括把主种子转移至培养基中，该培养基含葡萄糖、胨、酪蛋白酸水解物和无菌水，PH值为4～6，生长3-4天。

8)根据权利要求6的方法，其中上述第二阶段步骤包括把来自第一阶段的培养物转移到—培养基中，该培养基含葡萄糖、胨、酪蛋白酸水解物和无菌水，PH值为4-6，生长2-3天。

9)根据权利要求5的方法，其中培养步骤进行10-14天。

10)根据权利要求1和2的方法，其中营养培养基含葡萄糖、甘油、酪蛋白酸水解物、麦芽汁、胨和DL-α氨基丁酸和无菌水、PH值为4-6。

11)根据权利要求10的方法，其中上述培养基含2-6％的葡萄糖、2-5.5％的甘油、1.5-5.5％的酪蛋白酸水解物、0.5-4.5％的麦芽汁、0.25-2.5％的胨、0.1-3％的DL-α氨基丁酸、其余为无菌水。

12)根据权利要求1的方法，其中先用碳酸氢钠溶液乙酸乙酯提取液后用水冲洗来进行脱色步骤。

13)根据权利要求1的方法，其中上述生物量的甲醇提取液是用甲醇摇动生物量而制成，并把由此得到的甲醇提取液进行快速蒸发处理而得到一面糊状残余物。

14)根据权利要求13的方法，其中把甲醇残余物溶解于蒸馏水中而获得—水溶液，然后用乙酸乙酯提取而得到—乙酸乙酯部分提取液，对此用碳酸氢钠处理并用水冲洗。

15)根据权利要求14的方法，通过快速蒸发而得到乙酸乙酯部分的浓缩物。

16)根据权利要求1的方法，其中上述混合溶剂由己烷、氯仿和甲醇组成，其比例为10∶9∶1。