[发明专利]应用低聚糖苷作为细菌粘连的抑制剂

权利要求书

1.含有至少一个末端L-岩藻糖单元的二-或低聚糖苷在制备用于治疗或预防与人胃粘膜幽门螺旋菌感染有关的人的疾病的药用组合物中的应用。

2.权利要求1所述的应用，其中所述糖苷能够结合存在于幽门螺旋菌表面的细菌细胞表面配基(adhesins)。

3.权利要求1或2所述的应用，其中含有至少一个末端L-岩藻糖单元的二-或低聚糖苷能够抑制或明显地减少幽门螺旋菌细胞与人胃粘膜组织切片的上皮细胞的粘连。

4.权利要求1～3中任何一项所述的应用，其中含有至少一个末端L-岩藻糖单元的二-或低聚糖苷能够抑制幽门螺旋菌细胞的粘连，与相应的非-预培育的细菌细胞的粘连相比，所述细菌细胞与浓度最高至500μg/ml的上述糖苷一起进行预培育，能够至少50％地抑制上述幽门螺旋菌与人胃粘膜组织切片上皮细胞的粘连。

5.权利要求3或4中任何一项所述的应用，其中人胃粘膜组织切片制备如下：用福尔马林固定非-病变的人胃粘膜组织标本，嵌入标本于石蜡中，得到约5μm嵌入标本的切片，将该切片置于载玻片上，用二甲苯和异丙醇洗涤，使切片脱去石蜡，切片与缓冲液一起培育，所述缓冲液为磷酸盐缓冲的盐水，其中含有牛血清白蛋白和非离子型表面活性剂聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯，其浓度分别为约0.2％和0.05％。

6.权利要求3～5中任何一项所述的应用，其中幽门螺旋菌细胞被标记，优选荧光染料标记，尤其选用异硫氰酸酯荧光素标记。

7.权利要求6所述的应用，其中细菌细胞按下法标记：将细菌细胞在缓冲液(含有氯化钠和碳酸钠，优选浓度分别为约0.15M和0.1M，pH约9.0)中的混悬液用异硫氰酸酯荧光素(浓度约0.1mg/ml)处理，于室温培育1小时，通过离心分出细菌细胞，接着用含有非离子型表面活性剂聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(优选浓度为约0.05％)的磷酸盐缓冲的盐水洗涤细菌细胞。

8.权利要求4-7中任何一项所述的应用，其中细菌细胞与所述糖苷一起预培育是如下进行的：将浓度最高至500μg/ml的所述糖苷加到细菌细胞缓冲液的混悬液中，并优选于室温下预培育约2小时，所述缓冲液为磷酸盐缓冲的盐水，其中含有牛血清白蛋白和非离子型表面活性剂聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(优选浓度分别为约0.2％和0.05％)，通过离心分出细胞，并用相同缓冲液洗涤细菌细胞。

9.权利要求4-8中任何一项所述的应用，其中预培育或非预培育的细菌细胞的粘连用下法测定：将稀释的含有约10⁶～10⁸细菌细胞/ml的细菌细胞混悬液加到组织切片中，于室温和调湿室中将所述切片与细菌细胞混悬液一起培育1小时，以磷酸盐缓冲的盐水洗涤载玻片，并确定切片上皮细胞的粘连程度。

10.权利要求9所述的应用，其中所应用的细菌细胞按权利要求7所述方法制备，而与切片上皮细胞粘连的程度是在荧光显微镜下用视察法确定。

11.权利要求1-10中任何一项所述的应用，其中所应用的细菌细胞系选自幽门螺旋菌NCTC 11637菌株、NCTC 11638菌株、WV 229菌株和P466菌株。

12.权利要求1-11中任何一项所述的应用，其中与由幽门螺旋菌所引起的胃肠感染有关的疾病包括慢性活动性(B型)胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃腺癌和胃淋巴瘤。

13.权利要求1-12中任何一项所述的应用，其中二-或低聚糖苷为糖蛋白。

14.权利要求1-13中任何一项所述的应用，其中所述糖蛋白系选自人K-酪蛋白、人初乳IgA和牛颌下腺粘蛋白。

15.权利要求1-13中任何一项所述的应用，其中所述低聚糖苷具有二个末端L-岩藻糖单元。

16.权利要求15所述的应用，其中低聚糖苷糖链的非还原端上末端四糖为路易斯b-四糖，Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)G1cNAcβ1-。

17.一种治疗和/或预防由人胃粘膜幽门螺旋菌感染所引起的人的疾病的方法，所述方法包括给需要医治的患者使用有效量的含有至少一个末端L-岩藻糖单元的二-或低聚糖苷。