[发明专利]Ｄ－α氨基酸的制备方法

说明书

本发明涉及D-α氨基酸的制备方法，特别是涉及使用具有有关使D-N-氨基甲酰-α氨基酸转化成对应的D-α-氨基酸的酶的遗传因子的新型转化体的D-α-氨基酸的制备方法。

旋光活性的D-α-氨基酸类是作为药物中间体的重要化合物，尤其是，可以举出作为半合成青霉素类或半合成头孢菌素类的制造中间体的，D-苯基甘氨酸，D-对羟基苯基甘氨酸等工业上有用的化合物。作为这样的D-α-氨基酸类的制备方法，已知的有除去对应的D-N-氨基甲酰-α-氨基酸类的氨基甲酰基而制取的方法，而其除去氨基甲酰基是通过化学上的方法(特公昭58-4707号的说明书)或利用微生物的酶反应的方法(特公昭57-18793号说明书，特公昭63-20520号说明书，特公平1-48758号说明书)而进行的。

为了除去上述氨基甲酰基而采用的化学方法，由于大量使用硫酸等无机酸，因而存在着与此处理等相关的环境保护上的问题。另外，利用酶反应的方法，至今已知的作为酶供给源的微生物中都没有充分的酶产量，而且还具有在其酶的生产中必须用高价的海因化合物或N-氨基甲酰氨基酸化合物等的缺点。

本发明的目的在于要解决上述问题，研究制备高产量酶的微生物的同时，使用这样得到的酶源，以高效率地生产D-α-氨基酸。

在类似的技术中有特开昭63-24894号，但是该发明是关于L-α-氨基酸制法的技术，并没有示出关于D-α-氨基酸制备的实验例。

本发明是提供一种制备D-α-氨基酸的方法，其特征在于，使用含有有关除去D-N-氨基甲酰-α-氨基酸的氨基甲酰基并转化成对应的D-α-氨基酸的酶的遗传因子的DNA片段和载体DNA的重组体DNA，并将选自属于埃希氏杆菌属，假单胞菌属，黄杆菌属，芽孢菌属，沙雷氏菌属，棒状杆菌属或短颈细菌属的微生物的宿主菌体，通过转化而得的转化体生产的相应的酶的作用，在水性介质中使D-N-氨基甲酰(基)-α-氨基酸变换成对应的D-α-氨基酸，并采集生成的D-α-氨基酸。

另外，使由有关除去D-N-氨基甲酰-α-氨基酸的氨基甲酰基并使之变换成对应的D-α-氨基酸的酶的遗传因子与载体构成的重组体DNA导入微生物中，并发现该遗传因子质粒的例子，以前是完全不知道的，是通过本发明首获成功的。

用于本发明的，除去D-N-氨基甲酰-α-氨基酸的氨基甲酰基并变换成相应的D-α-氨基酸的酶，是在D-异构体中特异地起作用的酶，或是在D-体，L-体中起作用的酶，实际上都无妨。另外，对于D-N-氨基甲酰-α-氨基酸的立体选择性严格的酶，是叫做D-N-氨基甲酰-α-氨基酸酰胺水解酶。

用作本发明的含有遗传因子的DNA片段，可以举出，来源于真核生物，原核生物，病毒，噬菌体或质粒，并含有有关D-N-氨基甲酰-α-氨基酸酰胺水解酶的遗传因子的DNA片段。作为来自原核生物的遗传因子，是来自于属于细菌，特别是假单胞细菌属，土壤杆菌属，气杆菌属，短颈细菌属，芽胞杆菌属，黄杆菌属，沙雷氏杆菌属，细球菌属，节细菌属(ァスロバクタ-属，Arthrobacter)，产碱杆菌属，无色杆菌属，莫拉克氏菌属，副球菌(paracoccus)属等的细菌的遗传因子，较好的是有关D-N-氨基甲酰-α-氨基酸酰胺水解酶的遗传因子。这样的菌株的具体实例为如下所列：阴沟气杆菌(Aerobacter cloacae)I AM 1221、斑点芽孢杆菌(Bacillusmacroides)ATCC 12905、蜂房芽孢杆菌(Bacillus alvei)IFO 3343，产氨短颈细菌(Brevibacterium ammoniagenes)IFO 12071，黄色黄杆菌(Flavobacterium flavescens)IFO 3086、藤黄八叠球菌(Sarcinalutea)IFO 1099、粘质赛氏杆菌(Serratiamarcescens)IFO 3054、藤黄小球菌(Micrococcus luteus)IFO 12708、亲水气杆菌(Aeromonashydrophila)IFO 3820、土壤杆菌(Agrobacterium