[发明专利]能够在沙门氏疫苗菌株表面表达酸免疫疟疾抗原的重组表达载体

权利要求书

1、一种制备包括以下成分在内的重组表达型载体的方法：

(a)强诱导启动子；

(b)编码革兰氏阴性细菌杂化OmpA蛋白的杂化基因；

(c)位于OmpA基因中相对于Ompa蛋白第三外环部分的克隆位点；

它是通过将编码能够在哺乳动物中诱导体液免疫应答的疟疾抗原HRPⅡ或SERP或其一部分的DNA序列(d)插入到克隆位点(c)，所说的疟疾抗原最好得自恶性疟原虫。

2、如权利要求1所述的制备重组表达型载体的方法，它另外将编码流感血凝素（HA）蛋白1-48位和279-515位氨基酸的DNA序列（e）插入到所说的克隆位点（c），该DNA序列（e）在编码HA蛋白的46位氨基酸处含有第一个克隆位点，在编码HA蛋白的400位氨基酸处含有第二个克隆位点，其中所说的DNA序列（d）被插入到DNA序列（e）的至少一个所说克隆位点。

3、如权利要求1或2所述的制备重组表达型载体的方法，其中所说的HRPⅡ的部分由存在于具有表1所示限制性图谱的重组表达载体pOmpA-6中的189个氨基酸组成。

4、如权利要求1或2所述的制备重组表达型载体的方法，其中所说的HRPⅡ的一部分由存在于具有表1所示限制性图谱的重组表达载体pOmpA-3中的177个氨基酸组成。

5、如权利要求1或2所述的制备重组表达型载体的方法，其中所说的SERP的一部分含有与SH蛋白酶同源的区域。

6、如权利要求5所述的制备重组表达型载体的方法，它含有SERP的氨基酸442-892、573-595或745-787。

7、如权利要求1或2所述的制备重组表达型载体的方法，其中所说的SERP的部分含有至少一个T-细胞表面抗原。

8、如权利要求7所述的制备重组表达型载体的方法，它含有SERP的442-892氨基酸或640-700氨基酸。

9、按权利要求1-8中所述的任一项制备重组表达型载体的方法，其中所说的启动子是受控于存在于同一表达载体分子上游的lac-阻遏物的tac-启动子。

10、按权利要求1-9中所述任一项制备重组表达型载体的方法，其中所说的杂化基因（b）编码一杂化蛋白，其中

（ba）编码氨基酸1-233的DNA序列得自痢疾志贺氏菌OmpA基因;及

（bb）编码氨基酸234-325的DNA序列得自大肠杆菌OmpA基因。

11、按权利要求1-10中所述的任一项制备重组表达型载体的方法，其中所说的克隆位点是一个具有核苷酸序列5′-ATCGATGCATATGCTGACCCATGGTACCCGGGGAGGCCT-3′的多聚连接子。

12、通过用权利要求1-11中任一项的重组表达载体进行转化而制备转化的沙门氏疫苗菌株的方法。

13、按权利要求12所述的制备转化沙门氏疫苗菌株的方法，它得自伤塞沙门氏菌或鼠伤塞沙门氏菌。

14、制备能够在哺乳动物中诱导体液免疫应答的重组融合蛋白的方法，它是用权利要求1-11中所述的任一项重组表达型载体转化沙门氏疫苗菌株。

15、按权利要求14所述的制备重组融合蛋白的方法，其中所说的沙门氏疫苗菌得自伤塞沙门氏菌或鼠伤塞沙门氏菌。

16、用于预防疟疾的疫苗的制备方法，它是将权利要求12或13所述的沙门氏疫苗菌或权利要求12或13所述的重组融合蛋白或权利要求14的重组融合蛋白与任意结合的可药用载体或稀释剂结合使用。

17、按权利要求12或13的沙门氏疫苗菌株或按权利要求14或15的重组融合蛋白的剂量的使用方法，所说的剂量适于诱导保护性体液免疫应答，适用于疟疾的预防。