[发明专利]紫菜固相化细胞育苗方法

说明书

本发明涉及紫菜育苗方法，特别是紫菜体细胞育苗的方法。

传统的紫菜育苗方法是通过有性生殖进行育苗，这种方法的工序及管理繁杂，苗网的附苗密度难以保证，育苗周期长达5-6个月，近年来已有用研磨法获得条斑紫菜单细胞并培养成株，用酶解法从园紫菜、条斑紫菜、玫瑰紫菜、坛紫菜、朱红紫菜分离到单细胞并培养成株的实例说明紫菜离体细胞具有很强的再生力，这为采用紫菜体细胞育苗提供了新的途径。紫菜体细胞育苗的方法是将酶解法或研磨法获得的紫菜体细胞滴洒在网绳上，并在室内培养一段期间后放入海上养殖，这种方法虽然工序及管理化传统的育苗方法简捷、育苗周期可以缩短，但是苗网放在室内培养需要光照，占地面积很大，这为养殖生产上应用带来一定的困难，而苗网在室内培养的期间短，放入海上养殖则苗网上的紫菜体细胞容易被海浪冲掉，造成苗密度不均匀，未能达到养殖生产的要求，因此体细胞育苗技术尚难以在紫菜养殖生产上推广应用。

本发明的目的是以解决网绳上的体细胞容易被海浪冲掉的问题，确保网绳上的附苗密度达到养殖生产的要求，使紫菜体细胞育苗技术在紫菜养殖生产上推广应用。

紫菜固相比细胞育苗方法是将滴洒或浸泡而吸附紫菜体细胞的网绳用2-5%褐藻酸钠溶液均匀涂抹或浸泡，或用紫菜体细胞与褐藻酸钠溶液的混合液涂抹或浸泡网绳，然后把粘附紫菜体细胞和褐藻酸钠的网绳放入加有0.1M氯化钙的人工海水或自然海水中搅动，直至褐藻酸钠形成胶层凝固，再把凝固着紫菜体细胞和褐藻酸钠的网绳放入人工海水或自然海水中搅动洗去多余的氯化钙，随后暂养1-2天后放入海上养殖，也可以立即放入海上养殖。

本发明由于克服了苗网上的紫菜体细胞容易被海浪冲掉的问题，从而保证网绳上的附苗密度达到养殖生产的要求，使紫菜体细胞育苗技术在紫菜养殖生产上得以推广应用。

实现本发明的最好方式是把刚酶解或已培养过1-20天的紫菜离体细胞用海水配制成的浓度为1.5×10³-10⁵细胞/毫升的细胞液，并把细胞液滴洒在网绳上或把网浸泡在细胞液中，让细胞均匀吸附在网绳上之后稍阴干，随后用2-5%褐藻酸钠溶液均匀地涂抹在带有细胞的网绳上，或者把附有细胞的网浸泡于褐藻酸钠溶液中，使褐藻酸钠溶液均匀地粘附在网绳上，褐藻酸钠溶液的配制是在蒸溜水中加入氯化钠调制比重为1.010左右，再加入2-5%的褐藻酸钠加热溶解，待冷却到20℃左右使用;涂抹或浸泡过褐藻酸钠溶液的细胞网应放入加有0.1M氯化钙的人工海水或自然海水中充分搅动，使褐藻酸钠与氯化钙发生离子交联形成胶层凝固，经过1-5分钟后，紫菜体细胞被包埋在胶层内便可被网取出，放入人工海水或自然海水中不断搅动以洗去多余的氯化钙，即可立即放入海上养殖，也可暂养1-2天后放入海上养殖。上述方法在网绳上滴洒或浸泡细胞液与涂抹或浸泡褐藻酸钠两个步骤也可以结合起来进行，即把紫菜体细胞均匀混合于褐藻酸钠溶液中，然后把细胞与褐藻酸钠溶液的混合液均匀涂抹在网绳上，或者把网放入细胞褐藻酸钠混合液中，使混合液均匀地粘附在网绳上。在上述方法中使用褐藻酸钠不仅价格便宜，使用方便，而且对细胞无伤害，是理想的凝固剂，其它凝固剂角叉菜胶、琼脂、琼脂糖、明胶、聚丙稀酰胺也可用于固定紫菜细胞。实验证明本发明育苗时间仅需1-6天，操作简便、成本低、细胞利用率高、能有效控制苗密度，从而使紫菜体细胞育苗方法在养殖生产上推广应用成为可能。