[发明专利]一种血清外泌体miR-4712-3p作为眼肌型重症肌无力诊断性生物标志物的应用

说明书

本发明提供了一种检测血清外泌体miRNA表达量的试剂在制备诊断眼肌型重症肌无力的产品中的应用，所述血清外泌体miRNA为miR‑4712‑3p。本发明通过提取OMG和健康对照组的血清外泌体miRNA并进行深度测序及验证，结合生物信息学分析方法，结果表明，与健康对照组相比，OMG患者血清外泌体的miR‑4712‑3p水平显著下降，在OMG和健康对照组间的差异具有统计学意义，经过验证具有良好的诊断效能，灵敏度及特异性更高，与由此可见，血清外泌体来源的miR‑4712‑3p可以作为OMG诊断性生物标记物应用，以减少OMG的漏诊误诊。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种血清外泌体miR-4712-3p作为眼肌型重症肌无力诊断性生物标志物的应用。

背景技术

重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是一种主要由乙酰胆碱受体抗体介导的、T细胞依赖、补体和细胞因子参与，累及到神经肌肉接头的获得性自身免疫性疾病[1]。MG可累及全身骨骼肌，表现为波动性肌无力[1]。根据改良Osserman分型，MG可分为眼肌型、全身型、重度激进型、迟发重度型及肌萎缩型等[1]。当肌无力累及到面肌、四肢肌、延髓肌等其他骨骼肌时，称全身型重症肌无力(systemic myasthenia gravis GMG)。GMG较眼肌型重症肌无力(ocular myasthenia gravis,OMG)患者更容易出现严重的症状，甚至可能发生呼吸肌无力而危及生命。因此，OMG的早发现、早诊断和早治疗，是延缓甚至防止OMG进展为GMG的关键。

OMG是MG中最常见的一种亚型，仅累及提上睑肌、眼轮匝肌、眼外肌，占MG的50％[2]。OMG主要表现为波动性的上睑下垂、复视/斜视、眼睑闭合不全。当上睑下垂或斜视症状明显时，处于视力发育关键期的儿童患者易发生弱视和立体视觉障碍。OMG受累眼肌无力的程度具有波动性，疲劳后加重，休息、睡眠和低温后改善。OMG可发生于所有年龄、种族和民族，但临床症状和对治疗的反应差异很大。

根据中国重症肌无力诊断和治疗指南(2022版)，OMG诊断依据：1)波动性眼肌无力：上睑下垂、复视和/或斜视；2)乙酰胆碱受体抗体(acetylcholine receptorsantibody,AChR-Ab)、肌肉特异性酪氨酸激酶受体抗体(muscle-specific kinaseantibody,MuSK-Ab)、低密度脂蛋白相关蛋白4受体抗体(lipoprotein-related protein4antibody,LRP4-Ab)任一个阳性；3)肌电图阳性；4)新斯的明试验阳性；5)治疗性药物试验阳性。符合上述诊断标准中的第1点以及其他2至5项中任意一点，同时排除其他疾病引起的眼肌麻痹即可明确诊断。

但是，目前临床上对OMG的诊断存在一定的困难，原因如下：

1)在临床表现方面，对于神经内科医生和眼科医生来说，累及提上睑肌引起的上睑下垂症状诊断并不困难，但是眼外肌受累出现斜视或复视时，早期表现较为隐匿，临床检查较为专业，无论对于神经科医生还是非眼肌专业的眼科医生来讲，都具有一定的难度。

2)在新斯的明试验方面，在新发病例中敏感性高，但针对病程较长的病例，由于发病时间较长引起的眼外肌肌肉挛缩，可使眼球固定于某一眼位，导致药物作用不明显。

3)现有的抗体检测，包括AChR-Ab、MuSK-Ab，LRP4-Ab，其中任一抗体阳性即可确诊。据报道AChR-Ab阳性率在GMG中为85％-90％[6]，而在OMG中阳性率仅为50％左右[1]，远低于GMG。在AchR-Ab阴性MG患者中，70％的患者存在血清MuSK-Ab阳性，可进一步协助MG诊断，但MuSK-MG患者主要为累及延髓、颈部、肩部及面部肌肉的GMG，眼部受累较为少见[3，4]。LRP4-Ab在国外MG患者中的阳性率为0.45％～40％[5]，在国人MG患者中阳性率仅0.7％-1.7％[6],远低于国外报道，可能与种族差异有关。