[发明专利]一种基因组DNA提取试剂盒及基因组DNA的提取方法

说明书

本申请涉及DNA提取的技术领域，具体公开了一种基因组DNA提取试剂盒及基因组DNA的提取方法。本申请提供的基因组DNA提取试剂盒，包括组织保存液；所述组织保存液包含500‑1000mM的NaCl、5‑15mM且pH为8.3的Tris‑Cl、10‑75mM的EDTA、0.5‑2%(v/v)的Triton®X‑100、0.5‑2%的十二烷基硫酸钠。本申请利用上述试剂盒提供了基因组DNA的提取方法，该方法提取到的基因组DNA完整性高，纯度好，能够满足动物三代测序基因组DNA的需求；且该提取方法适用于海洋动物样本和昆虫样本，普适性强。

技术领域

本申请涉及DNA提取的技术领域，具体涉及一种基因组DNA提取试剂盒及基因组DNA的提取方法。

背景技术

随着测序技术的发展，第三代测序即单分子测序技术，近几年发展迅速。其特点是可以基于基因组层面的de novo组装和重测序，可以实现对每一条DNA分子的单独测序；不依赖于PCR扩增的三代测序技术对基因组DNA的总量、纯度等要求很高，是测序成功的关键所在。

比较经典的CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）方法需要搭配酚氯仿等有毒试剂进行杂质的去除，而硅胶吸附膜方法由于离心力的剪切作用，会损伤基因组的完整性。采用离子交换的原理提取基因组DNA，所提核酸的完整性较好，纯度高，特别适合大分子核酸提取，可适用于三代测序。

针对一些油脂含量高的海洋样本、几丁质含量高的昆虫样本，此类样本次生代谢产物多，会干扰基因组DNA的分离并影响纯度。因此，开发出一款普适性强的三代测序基因组DNA提取试剂盒是非常迫切的需求。

发明内容

为了提高基因组DNA提取方法的普适性，同时保证所提基因组DNA的得率和纯度，本申请提供一种基因组DNA提取试剂盒及基因组DNA的提取方法。

第一方面，本申请提供一种基因组DNA提取试剂盒，所述基因组DNA提取试剂盒包括组织保存液、裂解液、平衡结合液、漂洗液、洗脱液；

所述组织保存液包含500-1000mM的NaCl、5-15mM且pH为7.5-9.0的Tris-Cl、10-75mM的EDTA、0.5-2%(v/v)的Triton® X-100、0.5-2%的十二烷基硫酸钠；

所述平衡结合液、漂洗液、洗脱液中盐离子浓度的大小关系为平衡结合液漂洗液洗脱液。

本申请利用上述组织保存液和裂解液、平衡结合液、漂洗液、洗脱液组成基因组DNA提取试剂盒，可以最大程度的保护核酸，提高基因组DNA的得率和纯度，可用于提取海洋动物和昆虫等样本，普适性强。利用该试剂盒提取到的基因组DNA完整性大于30kb，得率高，OD260/280和OD260/230纯度好，能够满足三代测序基因组DNA的需求。

优选地，所述基因组DNA提取试剂盒还包括CS1组织过滤器；所述CS1组织过滤器包含30ml注射器、两层20um筛板、一层无纺布。

优选地，所述基因组DNA提取试剂盒还包括DEAE（二乙基氨基乙基）弱阴离子交换树脂；所述DEAE弱阴离子交换树脂是二乙基氨基乙基弱阴离子修饰的多孔硅胶粉，粒径范围70-100μm，每克硅胶粉偶联DEAE基团2-3μmol。

进一步地，所述DEAE弱阴离子交换树脂填充于耗材中制作成DNA吸附柱。

本申请提供的CS1组织过滤器可以初步过滤掉杂质，流出液在适当盐离子及pH值的平衡结合液的条件下，利用重力流条件，释放出来的基因组DNA结合于DEAE弱阴离子交换树脂的吸附柱上，多余的杂质随流出液流出。然后，利用较高盐离子浓度的溶液作为漂洗液，可以将结合在DNA吸附柱上的蛋白等杂质漂洗掉，然后继续增加盐离子浓度、并改变pH值范围作为洗脱液，基因组DNA从预装柱上洗脱下来。整个操作流程具有方便、快速等优点，且全程利用重力，没有剪切力，可以最大程度保留基因组DNA的完整性。