[发明专利]一种基于生物传感器的快速检测沙门氏菌的方法

说明书

本发明适用于生物检测技术领域，提供了一种基于生物传感器的快速检测沙门氏菌的方法，包括以下步骤：将待检测牛奶高速离心后，去除上层脂肪和下层沉淀，并调节牛奶的pH值，将处理后的牛奶作为待检测样品；将生物传感器与待检测样品进行混合，捕获待检测样品中可能存在的沙门氏菌；将生物传感器与液体培养基混合，并将得到的混合物置于能使沙门氏菌增殖的条件下进行培养；将培养物吸入无菌注射器中，利用超滤膜过滤后，利用PBS进行洗涤，洗涤后的剩余物在紫外灯照射下观察是否有荧光，有荧光则说明有沙门氏菌，没有荧光则没有沙门氏菌。本发明检测方式简单、快速、便捷，只需根据紫外线照射后是否有荧光现象即可判断是否存在沙门氏菌。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种基于生物传感器的快速检测沙门氏菌的方法。

背景技术

沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌。1885年沙门氏等在霍乱流行时分离到猪霍乱沙门氏菌，故定名为沙门氏菌属，沙门氏菌属有的专对人类致病，有的只对动物致病，也有对人和动物都致病，目前已发现2500多种不同类型的沙门氏菌，其中约1400余种能够感染人类，在日常生活中，沙门氏菌主要感染动物性食品，如鸡肉、鸡蛋、牛奶、猪肉等，但蔬菜瓜果也能被沙门氏菌感染。沙门氏菌可引起恶心、呕吐、腹痛、腹泻、发烧等症状，据统计在世界各国的细菌性食物中毒案例中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首，我国的细菌性食物中毒有70％到80％是由沙门氏菌引起的。沙门氏菌感染是人们持续关注的公共卫生安全问题，沙门氏菌的快速检测筛查是预防和控制沙门氏菌感染、保障食品安全的关键，因此，对于食品中沙门氏菌的检测十分重要。

目前沙门氏菌的现行检验标准为GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》，主要通过培养法进行检测，此外还有聚合酶链式反应(PCR)以及酶联免疫吸附测定(ELISA)等方法。但培养法检测时间长，PCR法核酸提取操作复杂，ELISA法检测灵敏度低，都无法进行现场快速检测，不适用于目前快速检测的需求，因此，迫切需要一种快速、简便的沙门氏菌检测方法。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种基于生物传感器的快速检测沙门氏菌的方法，旨在解决上述背景技术中存在的问题。

本发明实施例是这样实现的，一种基于生物传感器的快速检测沙门氏菌的方法，包括以下步骤：

(1)将待检测牛奶高速离心后，去除上层脂肪和下层沉淀，并调节牛奶的pH值，将处理后的牛奶作为待检测样品；

(2)将生物传感器与待检测样品进行混合，捕获待检测样品中可能存在的沙门氏菌；

(3)将步骤(2)中可能捕获了沙门氏菌的生物传感器与液体培养基混合，并将得到的混合物置于能使沙门氏菌增殖的条件下进行培养；

(4)将步骤(3)得到的培养物吸入无菌注射器中，利用超滤膜过滤后，利用PBS进行多次洗涤，洗涤后的剩余物在355纳米紫外灯照射下观察是否有荧光，有荧光则说明有沙门氏菌，没有荧光则没有沙门氏菌。

优选地，步骤(1)中，所述高速离心的转速为12500-13000r/min，所述高速离心的时间为10-12min；所述去除上层脂肪和下层沉淀的步骤中，采用超滤膜，所述超滤膜的膜孔径为0.25-0.3μm。

优选地，步骤(1)中，所述调节牛奶的pH值的步骤中，采用Tris-HCl溶液，调节pH值为7.7。

优选地，步骤(2)中，所述生物传感器为免疫磁珠，所述免疫磁珠由谷胱甘肽修饰的CdTe量子点、沙门氏菌抗体与磁珠偶联而成。

优选地，步骤(2)中，所述混合的温度为35-38℃，所述混合的时间为25-35min。

优选地，步骤(3)中，所述增殖的条件为温度32-37℃、pH为7-7.5。