[发明专利]茶树在不同营养元素缺乏条件下荧光定量PCR内参基因及应用

说明书

本发明属于分子生物学领域，具体公开了一种茶树在不同营养元素缺乏条件下荧光定量PCR内参基因及应用，茶树荧光定量PCR内参基因是肌动蛋白基因ACTIN7、延伸因子基因EF‑1α、真核转录起始因子基因eIF‑4α、3‑磷酸‑甘油醛脱氢酶基因GAPDH、蛋白磷酸酶基因PP2A、TATA结合蛋白基因TBP和TIP41家族蛋白基因TIP41中至少一种。本发明提供了一种茶树荧光定量PCR内参基因及应用，通过对茶树在不同营养元素缺乏的条件下茶树不同组织间的表达稳定性进行评价，筛选出不同缺素处理下稳定表达的内参基因，为后续茶树营养吸收和代谢相关的功能基因研究提供内参。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种茶树荧光定量PCR内参基因及应用，尤其涉及一种茶树在不同营养元素缺乏条件下荧光定量PCR内参基因及应用。

背景技术

茶树(Camellia sinensis)是最重要的木本经济作物之一，在其生命周期中容易受到非生物和生物胁迫的影响。茶树的qRT-PCR内参基因选择已在茶树的不同器官、叶片发育阶段、各种非生物胁迫(即寒冷、干旱、重金属和氮处理)和生物胁迫(橘二叉蚜感染、茶小绿叶蝉感染和茶尺蠖感染)中有所研究。茶树qRT-PCR分析中最常用的内参基因包括CsACTIN1，CsEF1，CsGAPDH1，Cs18SrRNA(18S recombinant RNA)，CsTIP41，CsCLATHRIN(Clathrin adaptor complex subunit)，CsTBP1和CsSAND1(SAND family protein)。然而，没有关于不同营养缺乏条件下茶树中最适内参基因选择的研究。

实时荧光定量PCR(Quantitative real-time reverse-transcriptase PCR，qRT-PCR)是一种简单、灵敏和准确的基因表达定量方法，已被广泛用于评估基因的转录水平。然而，这个“金标准”将受到不同质量的RNA、PCR扩增效率和选用的内参基因的影响。因此，选择一个或多个合适的内参基因来规范目的基因表达水平至关重要。

在植物中，qRT-PCR的内参基因通常是稳定表达的基因，其中常用的内参基因包括：肌动蛋白基因(ACTIN)、延伸因子基因(Elongation factor-1a，EF-1α)、真核转录起始因子基因(Eukaryotic translation initiation factor 4α，eIF-4α)、3-磷酸-甘油醛脱氢酶基因(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)和TATA结合蛋白基因(TATA-box binding protein，TBP)。然而，每个特定内参基因的转录水平在不同的植物物种、实验条件以及植物组织和发育阶段并不总是稳定的。例如，在中国大白菜(Brassicarapa L.ssp.pekinensis)中，最稳定的内参基因之一被确定为GAPDH，但它在中国无头大白菜中不是一个合适的选择。当暴露于不同的非生物胁迫条件下，PP2A(Proteinphosphatase 2A，PP2A)在高粱(Sorghum)中最稳定；杉木(Cunninghamia lanceolata)中GAPDH是最稳定的内参基因；然而，GAPDH是白花前胡(Peucedanum praeruptorum dunn)中最不稳定的基因。此外，ACTIN是毛白杨(Populus tomentosa)经历初级和次级生长的茎段中的稳定内参基因，但它是杨树不同发育阶段中最不稳定的内参基因。此外，即使在同一物种的不同组织中，内参基因也并不总是稳定表达的。例如：ACTIN2在猕猴桃成熟叶，柱头臂和果肉中具有高稳定性，但ACTIN3在猕猴桃腋芽中具有高稳定性。因此，有必要在特定的实验条件下选择茶树中qRT-PCR稳定表达的内参基因。

发明内容

为了解决背景技术中存在的上述技术问题，本发明提供了一种茶树荧光定量PCR内参基因及应用，对茶树在不同营养元素缺乏的条件下茶树不同组织间的表达稳定性进行评价，以期筛选出不同缺素处理下稳定表达的内参基因，为后续茶树营养吸收和代谢相关的功能基因研究提供内参。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：