[发明专利]利用黑果枸杞愈伤组织生产花青素的方法

权利要求书

1.一种利用黑果枸杞愈伤组织生产花青素的方法，其特征在于，包括以下步骤：将过表达LrAN2基因的黑果枸杞愈伤组织悬浮培养20天～22天后，收集黑果枸杞愈伤组织，提取花青素。

2.根据权利要求1所述的利用黑果枸杞愈伤组织生产花青素的方法，其特征在于，所述悬浮培养的培养基为含0.45mg/L～0.55mg/L 6-BA和0.8mg/L～1.2mg/L 2,4-D的MS培养基。

3.根据权利要求2所述的利用黑果枸杞愈伤组织生产花青素的方法，其特征在于，所述悬浮培养的培养基为含0.45mg/L～0.55mg/L 6-BA和0.75mg/L～0.85mg/L 2,4-D的MS培养基。

4.根据权利要求1～3任一项所述的利用黑果枸杞愈伤组织生产花青素的方法，其特征在于，所述悬浮培养的培养基中还含有180mM～220mMNaCl和/或8mM～12mM NaHCO₃。

5.根据权利要求1～3任一项所述的利用黑果枸杞愈伤组织生产花青素的方法，其特征在于，所述悬浮培养中，过表达LrAN2基因的黑果枸杞愈伤组织的接种量为5％～20％。

6.根据权利要求5所述的利用黑果枸杞愈伤组织生产花青素的方法，其特征在于，所述悬浮培养中，过表达LrAN2基因的黑果枸杞愈伤组织的接种量为10％～15％；更优选接种量为9％～11％。

7.根据权利要求1～3任一项所述的利用黑果枸杞愈伤组织生产花青素的方法，其特征在于，所述悬浮培养中的装液量为18mL～22mL/100mL。

8.根据权利要求1～3任一项所述的利用黑果枸杞愈伤组织生产花青素的方法，其特征在于，所述悬浮培养的摇床速度为85rpm～105rpm，更优选为90rpm～100rpm。

9.根据权利要求1～3任一项所述的利用黑果枸杞愈伤组织生产花青素的方法，其特征在于，所述悬浮培养的光照条件为16h光照/8h黑暗或全光照，更优选为全光照。

10.根据权利要求1～3任一项所述的利用黑果枸杞愈伤组织生产花青素的方法，其特征在于，所述过表达LrAN2基因的黑果枸杞愈伤组织的制备方法包括以下步骤：

(1)以黑果枸杞果实cDNA为模板，SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3为引物，PCR扩增得到目的基因LrAN2；

(2)将目的基因LrAN2与pSuper1300::GFP载体连接，得到重组质粒pSuper1300::LrAN2-GFP；

(3)将重组质粒pSuper1300::LrAN2-GFP导入到黑果枸杞无菌外植体中，诱导出愈伤组织，即得。