[发明专利]青岛文昌鱼免疫相关AmphiERK5蛋白的制备及应用

说明书

本发明公开了一种青岛文昌鱼免疫相关AmphiERK5蛋白的制备及应用。本发明从青岛文昌鱼为中首次筛选克隆了AmphiERK5基因，明确了ERK5在青岛文昌鱼里的表达及进化分析，为脊椎动物免疫系统的发育提供理论基础。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种青岛文昌鱼免疫相关AmphiERK5蛋白的制备及应用。

背景技术

随着学术界对文昌鱼里存在着参与免疫作用分子的高度关注，文昌鱼自然成为了研究脊椎动物免疫系统起源与进化以及探讨无脊椎动物和脊椎动物免疫系统连接关系的理想实验动物模型。

ERK5(extracellular-regulated protein kinase 5,ERK5)是MAPK家族中的重要成员，在1995年由Zhou等发现，由于其含有特殊的长C端肽和12区循环，肽链长度约是其它MAPK家族蛋白的两倍，故又被称做大丝裂原活化蛋白激酶(big mitogen-activatedprotein kinase，BMK1)。序列分析显示ERK5基因序列与ERK1/2有53％的同源性，脊椎动物中的ERK5在炎症反应的产生、发展和调控免疫相关因子如NF-κB、TNF和IL的生物过程中起重要作用。文昌鱼作为动物进化途径中的重要代表动物，还没有形成完善的免疫系统，免疫方式相对原始，那么文昌鱼中是否存在ERK5，并且参与到免疫反应中，迄今为止，并未相关报道。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种从青岛文昌鱼中筛选的抗病免疫AmphiERK5基因的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的目的之二是提供编码所述抗病免疫基因蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的目的之三是提供含有所述抗病免疫基因蛋白的基因的载体，以及含有编码所述抗病免疫基因蛋白的基因或含有所述载体的宿主细胞。

本发明的目的之四是提供所述抗病免疫基因蛋白在制备青岛文昌鱼抗病制剂中的应用。

本发明的目的之五是提供编码所述抗病免疫基因蛋白的基因或所述的载体在制备转基因青岛文昌鱼中的应用。

本发明从青岛文昌鱼为中首次筛选克隆了AmphiERK5基因，明确ERK5在青岛文昌鱼里的表达及进化分析，为脊椎动物免疫系统的发育提供理论基础。

附图说明

图1为青岛文昌鱼总RNA提取的电泳检测结果。

图2为三对引物获得的青岛文昌鱼AmphiERK5基因三个RT-PCR产物的电泳检测结果。其中：1为566bp的AmphiERK5基因片段；2为961bp的AmphiERK5基因片段；3为606bp的AmphiERK5基因片段。

图3为青岛文昌鱼AmphiERK5基因片段和佛罗里达文昌鱼AmphiERK5基因片段的同源性比较。

图4为AmphiERK5基因在青岛文昌鱼成体组织的表达。其中：bs为branchial slit鳃裂；ee为external epithelium表皮；en为endostyle内柱；go为gonad生殖腺；hc为hepatic caeca肝盲囊；in为intestine肠；mu为muscle肌肉；nc为neural cord神经管；no为notochord脊索；标尺为200μm。

图5为青岛文昌鱼AmphiERK5蛋白的同源性分析。

图6为青岛文昌鱼AmphiERK5蛋白的进化分析。

图7为AmphiERK5在线分析结果。其中，A为β-转角，B为表面可及性，C为可塑性，D为抗原性，E为亲水性，F为优势线性表位。