[发明专利]一种共表达芽孢杆菌来源增强因子提高重组蛋白在枯草芽孢杆菌中表达量的方法

权利要求书

1.重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，表达外源蛋白和(1)～(4)任一蛋白：

(1)芽孢杆菌来源的A类青霉素结合蛋白PonA；

(2)芽孢杆菌来源的A类青霉素结合蛋白截短体DcPonA；

(3)枯草芽孢杆菌来源的ABC途径转运蛋白OppA；

(4)枯草芽孢杆菌来源的信号肽肽酶SppA。

2.根据权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的PonA是来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)或嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)的A类青霉素结合蛋白；

所述的PonA截短体是来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)或嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)的A类青霉素结合蛋白截短体。

3.根据权利要求1或2所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述PonA蛋白具有SEQID NO.1～5任一所示的氨基酸序列，或具有与SEQ ID NO.1～5所示序列具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.9％同一性的氨基酸序列。

4.根据权利要求1或2所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述PonA蛋白截短体为具有SEQ ID NO.6～10任一所示的氨基酸序列，或具有与SEQ ID NO.6～10所示序列具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.9％同一性的氨基酸序列。

5.根据权利要求1～4任一所述重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的外源蛋白包括超高温淀粉酶、中温淀粉酶或蔗糖异构酶。

6.根据权利要求5所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以pUB110为表达载体表达超高温淀粉酶、中温淀粉酶或蔗糖异构酶。

7.根据权利要求1～6任一所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以pAD123为表达载体表达所述A类青霉素结合蛋白PonA、A类青霉素结合蛋白PonA截短体、ABC途径转运蛋白OppA或信号肽肽酶SppA。

8.根据权利要求根据权利要求1～7任一所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的外源蛋白通过组成型启动子P_amyQ’进行表达。

9.根据权利要求根据权利要求1～8任一所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述A类青霉素结合蛋白PonA、A类青霉素结合蛋白PonA截短体、ABC途径转运蛋白OppA或信号肽肽酶SppA通过启动子P_glv或启动子P_HpaII进行表达。

10.根据权利要求1～9任一所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，宿主包括枯草芽孢杆菌SCK6。

11.一种提高枯草芽孢杆菌中重组蛋白表达量的方法，其特征在于，所述方法是在表达重组蛋白的同时过表达芽孢杆菌A类青霉素结合蛋白PonA、A类青霉素结合蛋白PonA截短体、ABC途径转运蛋白OppA或信号肽肽酶SppA。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述的重组蛋白包括超高温淀粉酶、中温淀粉酶或蔗糖异构酶。