[发明专利]一种靶向敲除CsWRKY41基因的sgRNA、CRISPR/Cas9载体及应用在审
| 申请号： | 202310575555.8 | 申请日： | 2023-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN116640771A | 公开（公告）日： | 2023-08-25 |
| 发明（设计）人： | 戴文珊;付明康;王敏 | 申请（专利权）人： | 赣南师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/113;C12N15/55;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/78 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 341000 江西省赣*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 靶向 cswrky41 基因 sgrna crispr cas9 载体 应用 | ||
1.CsWRKY41基因在调控柑橘韧皮部结构中的应用。
2.靶向敲除或敲减CsWRKY41基因或降低CsWRKY41基因表达的试剂在增加柑橘韧皮部厚度中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述靶向敲除CsWRKY41基因的试剂包括靶向敲除CsWRKY41基因的CRISPR/Cas9载体；所述载体中含靶向敲除CsWRKY41基因的sgRNA序列。
4.一种靶向敲除CsWRKY41基因的sgRNA序列，其特征在于，所述sgRNA序列包括CsWRKY41sgRNA1和CsWRKY41sgRNA2；所述CsWRKY41sgRNA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CsWRKY41sgRNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.一种靶向敲除CsWRKY41基因的CRISPR/Cas9载体，其特征在于，所述CRISPR/Cas9载体含权利要求4所述的靶向敲除CsWRKY41基因的sgRNA序列。
6.一种基于CRISPR/Cas9介导CsWRKY41定点编辑改变柑橘韧皮部显微结构的方法，其特征在于，包括以下步骤：
利用CRISPR/Cas9编辑方法定点敲除柑橘的CsWRKY41基因，获得韧皮部显微结构改变的柑橘。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述CRISPR/Cas9编辑方法使用的载体包括靶向敲除CsWRKY41基因的CRISPR/Cas9载体；所述载体中含靶向敲除CsWRKY41基因的sgRNA序列；所述sgRNA序列包括CsWRKY41sgRNA1和CsWRKY41sgRNA2；所述CsWRKY41sgRNA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CsWRKY41sgRNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
基于所述靶向敲除CsWRKY41基因的sgRNA序列，构建靶向敲除CsWRKY41基因的CRISPR/Cas9载体，利用农杆菌介导法转化柑橘。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述转化包括转化柑橘的上胚轴。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述柑橘包括哈姆林甜橙。
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