[发明专利]褐飞虱靶标融合基因NlCHS-Cht1及其具有高效致死作用的纳米共递送体系

权利要求书

1.一种褐飞虱靶标融合基因NlCHS-Cht1，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种重组载体pESI-T-NlCHS-Cht1，其特征在于：所述重组载体含有权利要求1所述褐飞虱融合基因NlCHS-Cht1的表达载体，其中，所述表达载体为pESI-T载体。

3.一种重组载体L4440-NlCHS-Cht1，其特征在于：所述重组载体含有权利要求1所述褐飞虱融合基因NlCHS-Cht1的表达载体，其中，所述表达载体为L4440。

4.一种含有权利要求4所述重组载体L4440-NlCHS-Cht1的宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞为HT115感受态细胞。

5.利用权利要求4所述宿主细胞诱导提取dsNlCHS-Cht1的方法，其特征在于：所述方法是将含有重组载体L4440-NlCHS-Cht1的宿主细胞培养，摇至OD600＝0.40左右加入IPTG，使其终浓度为1mM，进行诱导表达，37℃振荡培养4h，提取细菌总RNA，纯化后得到的dsRNA，即为dsNlCHS-Cht1。

6.一种具有高效致死作用的纳米共递送体系，其特征在于：所述纳米化杀虫剂的原料按重量份数比计包括1份的六水合硝酸锌、13～14份的2-甲基咪唑、0.03～0.08份的噻嗪酮和0.05～0.2份的权利要求5所述方法制备得到的dsNlCHS-Cht1。

7.根据权利要求6所述具有高效致死作用的纳米共递送体系，其特征在于：所述纳米化杀虫剂的原料按重量份数比计包括1份的六水合硝酸锌、13.86份的2-甲基咪唑、0.06份的噻嗪酮和0.10份的dsNlCHS-Cht1。

8.一种具有高效致死作用的纳米共递送体系的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)按重量份数比称取1份的六水合硝酸锌溶液、13～14份的2-甲基咪唑溶液、0.03～0.08份的噻嗪酮和0.05～0.2份的权利要求5所述方法制备得到的dsNlCHS-Cht1；

2)将六水合硝酸锌和2-甲基咪唑分别溶于0.1％Triton X-100水溶液中，分别得到六水合硝酸锌Triton X-100水溶液和2-甲基咪唑Triton X-100水溶液；

3)将噻嗪酮溶液溶于二甲基亚砜DMSO中，得到噻嗪酮饱和DMSO溶液；

4)将dsNlCHS-Cht1加入六水合硝酸锌Triton X-100水溶液，室温搅拌；得到反应溶液；然后向反应溶液中加入噻嗪酮饱和DMSO溶液，室温搅拌混合均匀，最后加入2-甲基咪唑Triton X-100水溶液室温反应，反应结束后，离心收集纳米颗粒，用去离子水和无水乙醇洗涤三次，真空干燥；最终得到具有高效致死作用的纳米共递送体系Buprofezin@dsNlCHS-Cht1@ZIF-8。

9.根据权利要求8所述具有高效致死作用的纳米共递送体系的制备方法，其特征在于：所述步骤4)中，离心转速为10000rpm。

10.一种权利要求6所述的纳米共递送体系在防治褐飞虱中的应用。