[发明专利]一种基于CRISPR-Cas9系统的外泌体microRNA检测生物传感器及检测方法在审
| 申请号： | 202310549883.0 | 申请日： | 2023-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN116574788A | 公开（公告）日： | 2023-08-11 |
| 发明（设计）人： | 黄琳;周梦洋 | 申请（专利权）人： | 安徽医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6825 | 分类号： | C12Q1/6825;C12N15/11;C12N9/22 |
| 代理公司： | 合肥兆信知识产权代理事务所(普通合伙) 34161 | 代理人： | 汪洋 |
| 地址： | 230032 安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 crispr cas9 系统 外泌体 microrna 检测 生物 传感器 方法 | ||
1.一种基于CRISPR-Cas9系统的外泌体microRNA检测生物传感器，其特征在于：包括：
sgRNA复合物，所述的sgRNA复合物通过纳米材料、3’端修饰有生物素的复合物活性抑制探针、CRISPR-Cas9系统中的sgRNA之间的反应构建形成；
识别探针，所述的识别探针用于与脱氧核苷酸、聚合酶和外切酶配合，构建形成杂交反应体系，在杂交反应体系中，识别探针与标准品外泌体中释放的特定microRNA进行杂交，并在脱氧核苷酸、聚合酶和外切酶的作用下，循环引发产生对应的信号核酸序列，信号核酸序列与所述的sgRNA复合物反应后，释放sgRNA，分离出的sgRNA与Cas9蛋白结合，形成sgRNA最终复合物；
结合有荧光染料的靶标双链DNA，所述的靶标双链DNA用于与sgRNA最终复合物反应，生成附着有荧光染料的上清液，基于上清液的荧光值，建立荧光值与标准品外泌体中microRNA含量的相关线性曲线。
2.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR-Cas9系统的外泌体microRNA检测生物传感器，其特征在于：所述的复合物活性抑制探针具有用于与sgRNA的部分核酸序列进行互补的活性抑制核酸序列，且所述的活性抑制核酸序列还用于与引发产生的信号核酸序列进行互补。
3.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR-Cas9系统的外泌体microRNA检测生物传感器，其特征在于：所述的识别探针包括microRNA识别核酸序列、外切酶识别核酸序列以及信号引发核酸序列；
所述的microRNA识别核酸序列用于识别外泌体中释放的特定microRN A，并与其进行互补；
所述的信号引发核酸序列用于引发生成与其互补的信号核酸序列。
4.根据权利要求3所述的一种基于CRISPR-Cas9系统的外泌体microRN A检测生物传感器，其特征在于：所述特定microRNA包括但不限于microR NA-21、microRNA-141、microRNA-155、microRNA-200a、microRNA-203、microRNA-205、microRNA-210、microRNA-214。
5.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR-Cas9系统的外泌体microRNA检测生物传感器，其特征在于：所述的纳米材料采用纳米磁珠。
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