[发明专利]用于检测刚地弓形虫的引物和探针及其应用、试剂和试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测刚地弓形虫的引物和探针及其应用、试剂和试剂盒，涉及生物技术领域。本发明提供的用于检测刚地弓形虫的引物和探针，引物包括第一引物对和第二引物对；第一引物对具有如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示的核酸序列；第二引物对具有如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.8所示的核酸序列；探针包括第一探针和第二探针；第一探针具有如SEQ ID NO.5所示的核酸序列；所述第二探针具有如SEQ ID NO.10所示的核酸序列。该引物和探针，特异性强，灵敏度高，能够用于刚地弓形虫的检测，以及与刚地弓形虫感染相关疾病的辅助诊断。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种用于检测刚地弓形虫的引物和探针及其应用、试剂和试剂盒。

背景技术

刚地弓形虫遍布于世界各地，人群感染广泛。人感染弓形虫后，眼弓形虫病的发生率仅次于脑弓形虫病。弓形虫可在眼部引起局灶性坏死性视网膜炎或视网膜脉络膜炎，是后葡萄膜炎最常见的病因之一，相关临床和检验所对弓形虫的检测将对该病的防治有重要的实用价值。

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii，简称弓形虫)是一种呈世界性分布的专性细胞内寄生虫，广泛寄生于机体的有核细胞内，主要侵犯宿主的中枢神经系统、眼、淋巴结、肝和心等重要脏器。弓形虫病多数为先天性感染，80～90％的先天性弓形虫病伴有眼部疾病，是潜在的致盲眼病；后天获得性急性眼弓形虫病多为隐性感染。其预后主要取决于宿主的免疫力，正常人感染后可呈隐性或亚临床症状，而免疫缺陷的患者隐性感染的弓形虫活化可产生严重后果。由于人们生活习惯的改变，越来越多的人罹患眼弓形虫病。

眼弓形虫病(ocular toxoplasmosis，OT)被认为是感染性后葡萄膜炎最常见的原因之一。眼弓形体病是人体感染刚地弓形虫后，速殖子经血液传播跨越血-视网膜屏障进入眼部而引发的疾病。该病被认为是世界上最常见的视网膜感染性疾病，占后葡萄膜炎总病例的20-60％；在临床确诊的弓形虫感染病例中，眼弓形体病的发病率约为2％。在免疫功能正常的个体中，该疾病虽被认为“自愈性”疾病，但其危害仍不能忽视。该疾病除急性期所引起的坏死性视网膜炎造成的视力损害外，更大问题在于慢性期弓形虫包囊能够长期寄生在组织周围，存在疾病复发的风险，目前尚未发现有效的解决办法。眼弓形虫病易与其他类型葡萄膜炎混淆，临床上常被漏诊、误诊，可引起部分患者严重、不可逆性视功能损害。因此，加强和重视对该病的诊断非常重要。

目前弓形虫的鉴定方法主要有涂片染色法、动物接种分离法或细胞培养法、血清学检测、核酸检测等。涂片染色法简便，但检出率不高；动物接种分离法或细胞培养法是常用的细胞学检查方法，但较为困难和繁琐；血清学检测受个体免疫差异、抗体动力学影响，部分易受样本影响；以病原体特异性靶标基因为检测对象的核酸检测法灵敏度高、特异性强且检测快速，对于眼科感染性病原体的快速准确诊断具有很大的优势。

荧光定量PCR技术作为一种高灵敏度、高特异性、简便快速的检测方法已经在许多领域得到广泛应用。其优点包括：(1)高灵敏度，可检测低至1-5个拷贝数的病原体，有效避免漏检；(2)高特异性，在普通PCR的基础上增加高特异性的荧光探针，在同一反应管内同时检测多个靶标基因可进一步提高检测特异性，有效避免错检和漏检；(3)安全无污染，扩增反应和信号检测在同一个反应管内完成，不需要开盖操作，不容易产生气溶胶污染。

综上所述，刚地弓形虫的传统检测方式存在检测速度慢、诊断操作繁琐复杂、检出率不高的劣势，在临床上急需开发一种用于检测眼内液刚地弓形虫的方法以提供辅助诊断。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种用于检测刚地弓形虫的引物和探针，以解决上述问题中的至少一种。

本发明的第二目的在于提供上述引物和探针在制备刚地弓形虫检测产品中的应用。

本发明的第三目的在于提供一种用于检测刚地弓形虫的试剂。