[发明专利]基于四基因打分法的结核检测的数字PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一种基于四基因打分法的结核检测的应用，其中检测的结核感染宿主标志基因为IFIT1、IFIT3、OAS1、CXCL10，包括：获取结核感染宿主标志基因IFIT1、IFIT3、OAS1、CXCL10的转录水平，按照如下公式计算得到四基因打分：

四基因打分打分＝Bf1/Bf3+B0/Bf3+Bc/Bf3；

其中Bf1为IFIT1的转录水平，Bf3为IFIT3的转录水平，BO是OAS1的转录水平，Bc是CXCL10的转录水平，若四基因打分大于第一阈值则判断患者结核有结核分枝杆菌感染，在第一阈值和第二阈值之间为结核潜伏，大于第二阈值为活动性结核患者。

2.根据权利要求1所述的基于四基因打分法的结核检测的应用，其特征在于，基于数字PCR方法进行四个结核感染宿主标志基因的转录水平的检测。

3.根据权利要求2所述的基于四基因打分法的结核检测的应用，其特征在于，在同一扩增体系的不同通道内检测四个结核感染宿主标志基因，获取对应通道的检测值作为结核感染宿主标志基因的转录水平。

4.根据权利要求1所述的基于四基因打分法的结核检测的应用，其特征在于，第一阈值为2.2，第二阈值为2.8。

5.一种基于四基因打分法的结核检测的数字PCR检测试剂盒，其特征在于，包括：

特异性扩增结核感染宿主标志基因IFIT1的引物序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，探针序列如SEQ ID NO:3所示；

特异性扩增结核感染宿主标志基因IFIT3的引物序列如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示，探针序列如SEQ ID NO:6所示；

特异性扩增结核感染宿主标志基因OAS1的引物序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示，探针序列如SEQ ID NO:9所示；

特异性检测结核感染宿主标志基因CXCL10的引物序列如SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示，探针序列如SEQ ID NO:12所示。

6.根据权利要求5所述的基于四基因打分法的结核检测的数字PCR检测试剂盒，其特征在于，包括如SEQ ID NO:13-14的随机引物和SEQ ID NO:15的探针作为外源内参。

7.根据权利要求5所述的基于四基因打分法的结核检测的数字PCR检测试剂盒，其特征在于，用于数字PCR检测，在同一扩增体系的不同通道内进行检测，获取不同通道的检测值作为对应结核感染宿主标志基因的转录水平，基于按照如下公式计算得到四基因打分：

四基因打分＝Bf1/Bf3+B0/Bf3+Bc/Bf3；

其中Bf1为IFIT1的转录水平，Bf3为IFIT3的转录水平，BO是OAS1的转录水平，Bc是CXCL10的转录水平，若四基因打分大于第一阈值则判断患者结核有结核分枝杆菌感染，在第一阈值和第二阈值之间为结核潜伏，大于第二阈值为活动性结核患者。

8.根据权利要求7所述的基于四基因打分法的结核检测的数字PCR检测试剂盒，其特征在于，第一阈值为2.2，第二阈值为2.8。

9.一种根据权利要求5到8任一所述的基于四基因打分法的结核检测的数字PCR检测试剂盒的应用，其特征在于，用于非诊断目的的结核潜伏以及活动性结核检测。

10.根据权利要求9所述的基于四基因打分法的结核检测的数字PCR检测试剂盒的应用，其特征在于，将特异性扩增结核感染宿主标志基因为IFIT1、IFIT3、OAS1、CXCL10以及外源内参的引物探针混合得到引物探针混合液，并混合所述引物探针混合液制备ddPCR反应体系，将待测血液样本提取的RNA和ddPCR反应体系混合后在设定的扩增程序下进行扩增检测得到结核感染宿主标志基因的转录水平的检测。