[发明专利]一种嵌合抗原受体、表达其的细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种嵌合抗原受体、表达其的细胞及其制备方法和应用，所述嵌合抗原受体包括胞外结构域、胞内共刺激结构域和跨膜结构域，所述胞外结构域包括ROR1特异性的scFv片段，所述胞内共刺激结构域包括CD28、CD3ζ和TLR2结构域。本发明所述嵌合抗原受体免疫细胞，在体内外均对肿瘤细胞具有良好的杀伤效果，可以为结直肠癌的治疗提供新靶点和新策略。

技术领域

本发明涉及肿瘤的细胞免疫治疗技术领域，具体涉及一种嵌合抗原受体、表达其的细胞及其制备方法和应用。

背景技术

结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，也是世界上第四大致命癌症，每年有近200万新发病例，近100万人死亡。此外，由于结直肠癌在早期和中期没有明显的症状，常直到晚期才被诊断出来。因此，尽管治疗方案不断改进，但转移性结直肠癌的预后仍然较差，中位总生存期仅为25-30个月。在这种情况下，需要进一步努力改善晚期结直肠癌患者的预后。

受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(Receptor tyrosine kinase-like orphanReceptor1,ROR1)是细胞膜上的跨膜蛋白通路，参与多种细胞功能，介导WNT通路信号传递。此外，ROR1在各种肿瘤中均有表达，在人类胚胎发育阶段高表达，而在成人组织中表达量极少或完全不表达。由于ROR1的特异性表达，它可以被当成肿瘤治疗的靶点。ROR1在结直肠癌中高度表达，但目前尚无靶向ROR1的CAR-T细胞治疗结直肠癌的报道。

基于目前结直肠癌治疗存在的问题和不足，第一，大多数结直肠癌患者在确诊时已经进入晚期，对手术、化疗等治疗方式不敏感；第二，预后不良，全球范围内的中位生存期仅为25-30个月；第三，由于结直肠癌异质性较高，现有靶点无法满足临床需求。

因此，如果靶向ROR1的嵌合抗原受体T细胞能有效清除肿瘤，将能为临床患者提供更多的生机和希望。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种嵌合抗原受体、表达其的细胞及其制备方法和应用。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括胞外结构域、胞内共刺激结构域和跨膜结构域，所述胞外结构域包括ROR1特异性的scFv片段，所述胞内共刺激结构域包括CD28、CD3ζ和TLR2结构域。

本发明首次提出将ROR1作为CAR-T细胞治疗结直肠癌的靶点，anti-ROR1CAR-T细胞在体内外均对肿瘤细胞具有良好的杀伤效果，可以为结直肠癌的治疗提供新靶点和新策略。

所述ROR1特异性的scFv片段的氨基酸序列包括如SEQ ID NO.1所示的序列。

SEQ ID NO.1：

QEQLVESGGRLVTPGGSLTLSCKASGFDFSAYYMSWVRQAPGKGLEWIATIYPSSGKTYYATWVNGRFTISSDNAQNTVDLQMNSLTAADRATYFCARDSYADDGALFNIWGPGTLVTISSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSELVLTQSPSVSAALGSPAKITCTLSSAHKTDTTDWYQQLQGEAPRYLMQVQSDGSYTKRPGVPDRFSGSSSGADRYLIIPSVQADDEADYYCGADYIGGYVFGGGTQLTVTG。

优选地，所述TLR结构域配置在CD3ζ结构域的C末端侧。

优选地，所述CD28结构域配置在CD3ζ结构域的N末端侧。

优选地，所述CD28的氨基酸序列包括如SEQ ID NO.2所示的序列。

SEQ ID NO.2：

RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS。