[发明专利]一种基于钙钛矿纳米晶的快速检测癌胚抗原免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种基于钙钛矿纳米晶的快速检测癌胚抗原免疫层析试纸条及其制备方法，所述免疫层析试纸条包括底板，样品垫，结合垫和硝酸纤维素膜，其制备方法为：将样品垫和结合垫进行预处理；通过柠檬酸三钠还原法制备金纳米颗粒，然后将其与癌胚抗原的抗体通过静电吸附偶联制备金纳米颗粒免疫探针，并将免疫探针固定在结合垫上；通过配体辅助再沉淀法合成钙钛矿纳米晶，并将其喷涂在硝酸纤维素膜上形成检测线和对照线，然后在检测线上单独喷涂BSA封闭的癌胚抗原；最后组装试纸条。本发明所述的试纸条具有检测快速、低成本、高灵敏度、低检测限、高选择性、无需大型仪器和专业操作人员等优点，在即时诊断中具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种免疫层析试纸条及其制备方法，尤其涉及一种基于钙钛矿纳米晶的快速检测癌胚抗原免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

近年来，癌症已经严重危害到人类的健康，癌症的早期筛查与诊断至关重要。患者血浆中的癌胚抗原是胰腺癌、结直肠癌、肺癌等癌症的临床诊断中常见的癌症标志物。血清中癌胚抗原的含量的异常升高，可能会导致患癌的风险的提高。

在之前的报道中通常采用荧光、化学发光、电化学、表面增强拉曼散射等方法来检测患者血清中的癌胚抗原含量，这些方法依赖于实验室基础设施并且现场操作起来很繁琐。因此，为了实现快速且方便的血清中癌胚抗原含量的监测，即时诊断(POCT)应运而生，POCT能够快速、灵敏、定量地检测癌胚抗原，对资源贫乏地区的诊断具有重要意义。目前亟待寻找一种能够快速、灵敏、定量检测癌胚抗原的测试方法。

发明内容

发明目的：本发明旨在提供一种能够实现癌胚抗原快速、灵敏检测的基于钙钛矿纳米晶的双读出信号免疫层析试纸条的制备方法。

技术方案：本发明所述的基于钙钛矿纳米晶的快速检测癌胚抗原免疫层析试纸条包括底板，样品垫，结合垫和硝酸纤维素膜，所述结合垫上固定有金纳米颗粒免疫探针，所述硝酸纤维素膜上涂有检测线和对照线，所述检测线由钙钛矿纳米晶溶液和牛血清白蛋白封闭的癌胚抗原喷涂得到，所述对照线由钙钛矿纳米晶溶液喷涂得到。

优选地，所述钙钛矿纳米晶溶液的喷涂浓度为1-3mg/mL，所述牛血清白蛋白封闭的癌胚抗原的喷涂浓度为2-20μg/mL。

优选地，所述检测线和对照线之间的距离为1-2cm，免疫层析试纸条上各部件的重叠部分的宽度为2-4mm。

所述基于钙钛矿纳米晶的快速检测癌胚抗原免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

(1)将样品垫浸泡在缓冲溶液中，然后取出放于真空烘箱中烘干备用；

(2)将结合垫浸泡在缓冲溶液中，然后取出放于真空烘箱中烘干备用；接着将金纳米颗粒免疫探针固定在上述预处理过的结合垫上，再放于真空烘箱中烘干备用；

(3)将钙钛矿纳米晶溶液和牛血清白蛋白(BSA)封闭的癌胚抗原喷涂在硝酸纤维素膜上形成检测线；并将等体积的钙钛矿纳米晶溶液喷涂在硝酸纤维素膜上形成对照线；然后，将这一硝酸纤维素膜放于真空烘箱中烘干备用；

(4)将上述预处理过的各部件和吸水纸依次组装到已切割成适宜宽度的PVC底板上，得到基于钙钛矿纳米晶的快速检测癌胚抗原双读出信号免疫层析试纸条。

优选地，步骤(2)中所述金纳米颗粒免疫探针的制备方法包括如下步骤：用碳酸钾调节金纳米颗粒溶液的pH，然后向溶液中加入癌胚抗原的抗体混合孵育，接着再加入牛血清白蛋白混合孵育以封闭多余的结合位点，最后将该溶液用磷酸缓冲溶液洗涤，再重新分散得到金纳米颗粒免疫探针溶液。

优选地，所述金纳米颗粒溶液的制备方法包括如下步骤：将氯金酸溶液和去离子水进行加热，然后迅速向溶液中加入柠檬酸三钠溶液，反应完全立即停止加热；待该溶液冷却至室温后进行洗涤，最后重新分散在蒸馏水中，得到金纳米颗粒溶液。