[发明专利]一种构建测序文库的方法及应用

说明书

本发明涉及一种构建测序文库的方法及应用。该构建测序文库的方法包括：S1、将核酸样本进行末端修复和加腺苷酸尾，得到加腺苷酸尾产物；S2、将所述加腺苷酸尾产物与接头进行连接，得到接头连接产物；其中，末端修复和加腺苷酸尾为连续进行的；其中，将所述加腺苷酸尾产物与接头进行连接为连续进行的；其中，将所述加腺苷酸尾产物与接头进行连接采用第二缓冲溶液，所述第二缓冲溶液不包括二价阳离子，且采用低分子量PEG。采用本发明的构建文库方法，能够实现一管到底的操作，全程反应均在一个体系中进行，只需加入下一步的反应液，不需纯化，仅PCR后一步纯化完成建库。大大简化了操作流程，而且还能提高文库产量。

技术领域

本发明涉及一种缓冲液组合物、包括该缓冲液组合物的试剂盒及应用。

背景技术

在二代测序中，待检测的待测序列分子，需要通过文库构建，为未知待测序列，添加上已知序列的测序接头；而在文库构建过程中，常存在待检测序列分子样本量不足的情况，如cfDNA检测、口腔拭子、干血斑、穿刺样本等痕量DNA检测需求，为满足后续文库质控、上机测序需求，必须进行PCR扩增，以放大测序模板量。

但是，在二代测序文库构建测序接头连接步骤，除了在目的片段两端各连接上一个测序接头的目标产物外，不可避免的会出现无插入目的片段的两个测序接头自连副产物，且该种接头自连副产物的产量(摩尔量)远高于正常目的片段连接的目标产物量(摩尔量)，现有的连接试剂，在推荐接头底物配比的反应体系下，副产物摩尔量大多为目标产物摩尔量的5-10倍。

通常，接头自连产物通常通过后续连接反应后磁珠纯化去除，但实际应用中，该步骤磁珠纯化对于接头自连产物去除效率不足，会残留较多接头自连产物进入后续PCR反应体系，接头自连副产物在整个连接产物中占比过高，即使经过纯化后部分去除，仍然会有较大量的副产物残留。

而且，现有的建库流程中，在末端修复和加腺苷酸尾之间需要纯化，在加腺苷酸尾产物与接头进行连接之间也需要纯化，增加了操作流程、建库时间和成本。目前虽然有对纯化过程进行优选的技术，例如CN113512766A公开了一种DNA二代测序文库的构建方法，以双酶切和末端修复一步反应工艺，第一步反应结束无需进行磁珠纯化，使得构建工艺简单，但是其在PCR扩增之前还是需要进行纯化。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种构建测序文库的方法，采用本发明的构建文库方法，能够实现一管到底的操作，在完成PCR扩增之前无需进行纯化，大大简化了操作流程，方便操作，而且还能显著降低接头二聚体副产物的产生，提高文库产量。

具体来说，本发明涉及如下构建测序文库的方法及应用。

1.一种构建测序文库的方法，包括：

S1、将核酸样本进行末端修复和加腺苷酸尾，得到加腺苷酸尾产物；

S2、将所述加腺苷酸尾产物与接头进行连接，得到接头连接产物；

其中，末端修复和加腺苷酸尾为连续进行的；

其中，将所述加腺苷酸尾产物与接头进行连接为连续进行的；

其中，将所述加腺苷酸尾产物与接头进行连接采用第二缓冲溶液，所述第二缓冲溶液不包括二价阳离子，且采用低分子量PEG。

2.根据上述的方法，其中，在S2之后，所述方法还包括：S3、将所述接头连接产物进行PCR扩增；

优选地，将所述接头连接产物进行PCR扩增为连续进行的；

优选地，在PCR扩增完成前，无需进行纯化。

3.根据上述的方法，其中，在S1之前，所述方法还包括将核酸样本进行片段化处理，得到片段化DNA。