[发明专利]马兜铃酸D的对照品的制备方法

说明书

本发明提供马兜铃酸D的对照品的制备方法，包括酸碱前处理工序、特定的聚酰胺柱层析工序以及正相和反相色谱柱提纯工序等，通过特定的前处理，有效提升了提取分离效率，能够高通量的获得HPLC纯度高的目标物对照品。另外，本发明获得的马兜铃酸D的固体对照品的制备方法，工业生产适用性非常好。

技术领域

本发明涉及一种马兜铃酸D的制备方法，尤其涉及能够制备可以用于适用于工业化的马兜铃酸D的固体对照品的制备方法。

背景技术

马兜铃酸类成分是一类硝基菲类羧酸，具有肾脏毒性和致癌性。已报道的大量马兜铃酸肾病病例中，有些马兜铃酸肾病患者后续发生尿路上皮癌和膀胱癌。泌尿系统致癌性的发现使马兜铃酸被列为Ⅰ类致癌物。马兜铃酸类成分是一类植物次生代谢产物，广泛存在于马兜铃科植物中。马兜铃科植物共有500多种，在亚洲地区被作为传统药物用于治疗多种疾病。中国地区的马兜铃科植物主要有4属共70余种，其中大多数是药用植物，常作为中药材配伍使用，具有止咳平喘、祛风止痛和清热活血等功效。现在存于2020版药典中的马兜铃科植物仅有细辛一种，细辛临床应用广泛，主要用于治疗过敏性哮喘、鼻炎、咳嗽以及新型冠状病毒感染等症。除了入汤剂外，大量的中成药制剂中亦含有细辛。《中国药典》收载有50种含细辛品种。很多品种极为常用，如小青龙颗粒、儿童清肺口服液、小儿咳喘颗粒、痧气体丸、鼻渊舒口服液、小儿肺闭宁片、辛芩颗粒、九味羌活片、川芎茶调片、鼻炎片、胃炎宁冲剂、人参再造丸、正天丸、杜仲壮骨丸等，其中不乏儿童常用药。在含马兜铃、土木香、木通、防己、寻骨风等药材的中成药中均检测到了马兜铃酸成份。为了避免药物中的马兜铃酸类成分在实际应用中带来的毒性伤害，对马兜铃酸毒性进行早期诊断，对于其安全性监测极为重要。

常见的马兜铃酸类成分有马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C、马兜铃酸D。目前国内外马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C的相关研究很多，马兜铃酸D的研究报道很少，市场上也很少有现成的马兜铃酸D供应。然而，马兜铃酸D(Aristolochic acid D)已经被列为《中华人民共和国药典》规定的毒性药材指标成分，其重要程度不容忽视。

马兜铃酸D，分子式:C17H11NO8

由于马兜铃酸D已被药典列为药典毒性指标成分，所以分离得到马兜铃酸D标准品能够极大的提高相关药材质量控制水平，显得十分必要，具有极高应用价值。

马兜铃酸D检测方面的专利文献较多，但是大量提取工艺方面的文献很少，大部分都是分离马兜铃酸D类似物。有文献报导通过醇提-碱溶酸沉-大孔树脂纯化-高压制备的方法，从关木通中分离获得马兜铃酸Ⅰ和II，纯度分别为96％和94.45％，没有得率数据。还有文献报导将马兜铃药材进行醇提，醇提物与硅胶拌样，烘干后依次用石油醚，氯仿，乙醇索氏提取，氯仿提取物经硅胶柱层析，重结晶获得马兜铃酸，从其它溶剂提取物中分离获得另外2中马兜铃酸类似物，未做结构鉴定，也没有纯度和得率数据。还有文献报导，通过醇提-浓缩析出-沉淀经酒精多次洗涤-硅胶柱层析-重结晶的方法，从朱砂莲中分离获得马兜铃酸，得率0.45％，没有纯度数据。

专利文献

[1]一种细辛中6种马兜铃酸类成分的含量测定方法CN113252810 A

非专利文献

[1]屈碧琼，刘洁，阳娇，杨晓芹，潘绮雪，刘明妍，刘璐璐，肖红斌.马兜铃酸Ⅰ，II的制备工艺研究[J].华西药学杂志，2022,37(3)：245-248.

[2]李舒养，姚琪.广西马兜中马兜铃酸的分离与鉴定[J].中国药学杂质，1981,(02)：15-18.

[3]邱运平，陈秀珍，全德健，文玲芳，巫燕妹.朱砂莲化学成分的研究Ⅰ，马兜铃酸的分离[J].广西植物，1980,(01)：24-27.