[发明专利]一种卵巢癌培养基、类器官培养和传代方法

说明书

一种肠癌专用的类器官培养基、培养方法和传代方法本发明公开了一种卵巢癌培养基、类器官培养和传代方法，本发明提供的卵巢癌类器官培养基其成分含有HGF、IGF‑1、Insulin(Human)。HGF(肝细胞生长因子)与其受体c‑met结合后，调节卵巢癌细胞的生长、抑制卵巢癌细胞凋亡。IGF‑1(胰岛素样生长因子‑1)通过刺激RNA和DNA的合成而促进卵巢癌细胞增殖和(或)抑制细胞凋亡，参与调控细胞的增生、分化、凋亡。Insulin(Human)促进细胞对葡萄糖的摄取和利用。本发明提供的卵巢癌类器官培养方法，能够在培养初期快速得到类器官，并类器官不易凋亡可以稳定传代。

技术领域

本发明涉及类器官培养技术领域，具体涉及一种卵巢癌培养基、类器官培养和传代方法。

背景技术

卵巢癌(OC)是女性生殖器官三大恶性肿瘤之一，其发病率仅次于子宫颈癌和子宫内膜癌，其5年生存率在早期患者为90％，晚期患者不足30％；70％的患者发现时已至晚期，其死亡率位居各类妇科肿瘤的首位。在过去的几十年里，新治疗方案(例如靶向治疗和免疫治疗)已经取得了巨大的进展。然而，由于肿瘤异质性导致的治疗耐药性和临床前数据与实际临床疗效之间的差距，限制了卵巢癌患者5年生存率的提高。

为了解决卵巢癌肿瘤的临床用药问题、预防术后复发从而提高患者5年生存率，迫切需要具有肿瘤异质性的稳定的临床前卵巢癌模型。肿瘤2D细胞系具有培养简单、可以大量增殖、无限生长等优点，可以广泛应用于各种实验。但是细胞系仅可以保留其来源的癌症细胞的部分特征，2D培养细胞系与内源性癌组织的差异表达基因的数量远远高于正常细胞与内源性的差异表达基因数量。这些缺陷大大降低了癌症研究的准确性。另一种常用的人类肿瘤研究模型，患者来源的肿瘤异种移植(PDX)模型直接来源于患者，能准确反映肿瘤的遗传异质性。但建立模型成本高、耗时长等缺点限制了其在肿瘤精准治疗中的广泛应用。而类器官模型有与体内器官高度相似的遗传学背景及组织学特征；拥有类似真实器官的复杂结构，能部分模拟来源组织器官的生理功能。且类器官具有培养速度快、操作简单、低花费等优点。由此可见，类器官弥补了异种移植的缺陷，可以用于肿瘤精准治疗的研究。

由于类器官是多能干细胞或器官祖细胞分化，自组装成有结构和功能的三维组织结构。形成各种类器官往往需要培养基、基质、生长因子和小分子化合物等等组分，且不同种类器官所需要的组分不尽相同。而现有的技术中，针对卵巢癌类器官的培养基以及卵巢癌的培养方法的研究较少，且培养效果不佳，难以获得在体外长期稳定培养的卵巢癌类器官模型。寻找一种能够高效培养得到卵巢癌类器官的培养基、高效的卵巢癌类器官的培养及传代方法是对临床医学研究有着重大的意义。

发明内容

针对上述背景技术中的问题，本发明的目的在于提供一种卵巢癌专用的类器官培养基、应用和培养方法、传代方法。

第一方面，本发明提供一种卵巢癌专用的类器官培养基。具体技术方案如下：

一种卵巢癌专用的类器官培养基，包含基础培养基Advanced DMEM/F12与以下浓度的组分：

1-5μM Glutamax、

10-20μM HEPES、

10-20μM Nicotinamide、

100-200ng/ml Noggin、

100-200nM A83-01、

1-2mM N-Acetylcysteine、

1-2％B-27、

100-200mg/ml Rspo1、

10-20nM Primocin、

5-10ng/ml FGF-10、

10-20ng/ml EGF、