[发明专利]一种改良的乳铁蛋白基因、重组表达载体及其应用

权利要求书

1.一种改良的乳铁蛋白基因，其特征在于，所述乳铁蛋白基因的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示，所述乳铁蛋白基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.根据权利要求1所述的乳铁蛋白基因，其特征在于，构建所述乳铁蛋白基因所采用的引物，分别为SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列和SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列。

3.一种表达如权利要求1所示的乳铁蛋白基因的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体从5’至3’依次包含以下元件：来自花椰菜花叶病毒的启动子p35s、如SEQ ID NO:1所示的乳铁蛋白核苷酸序列、胭脂碱合成酶的终止子Nos；

所述来自花椰菜花叶病毒的启动子p35s的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；

所述胭脂碱合成酶的终止子Nos的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

4.根据权利要求2所述的重组表达载体的构建方法，其特征在于，步骤如下：(1)将权利要求1所述的的乳铁蛋白核苷酸序列连入克隆载体pEASY-T5上，得到重组克隆载体JK01-T；(2)用限制性内切酶NcoI和EcoRI分别酶切重组克隆载体JK01-T，将切下的乳铁蛋白核苷酸序列片段插入到所述重组克隆载体JK01-T的NcoI和EcoRI位点之间，构建成重组表达载体JK-PT01；(3)用HindIII和NcoI酶切重组克隆载体JK01CK-T，将切下的p35s启动子序列插入所述重组表达载体JK-PT01，替换掉所述重组表达载体JK-PT01上的pGmA1aB1b核苷酸序列，得到重组表达载体JK-PT01CK；所述pGmA1aB1b的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

5.根据权利要求1所述的乳铁蛋白基因、权利要求3所述的重组表达载体在生产乳铁蛋白中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括步骤：(1)将权利要求3所述的重组表达载体利用农杆菌介导法转化大豆的外植体，获得基因组中整合有权利要求1所述的乳铁蛋白基因的外植体；(2)将步骤(1)中所获得的外植体进行分化培养，获得再生植株筛选出表达权利要求1所述的乳铁蛋白基因的转基因大豆植株；(3)所获得的转基因大豆植株因其种子中含有表达的乳铁蛋白而具有附加营养价值，可以直接食用或加工成其它营养食品或作为其它食品的添加原料使用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述外植体为大豆幼苗的下胚轴。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述分化培养包括丛生芽分化、伸长芽分化、生根分化。