[发明专利]一种水产用丁酸梭菌的培养方法及其制剂的制备方法

说明书

本发明涉及丁酸梭菌技术领域，且公开了一种水产用丁酸梭菌的培养方法及其制剂的制备方法。该制剂的制备方法是利用中草药、麦麸为原料，与丁酸梭菌的协同作用进行发酵制得益生菌复方发酵制剂，这种制剂环节上相对减少、耗时较短，在添加丁酸梭菌对水产增强免疫功能的基础上，更能有效得改善肠道菌群结构，水质也相对提高，降低了有害物质对水产的威胁；丁酸梭菌的培养方法在控制条件和选择原料上进行相对应的优化，获得菌体产量高、设备条件要求低的优点。

技术领域

本发明涉及丁酸梭菌制剂技术领域，具体为一种水产用丁酸梭菌的培养方法及其制剂的制备方法。

背景技术

随着水产养殖业不断发展，在普通饲料中加入某些功能性添加剂，过往抗生素的用量远比其他添加剂的要高得多，但是其害处影响到整个行业的可持续发展与健康。丁酸梭菌作为一种绿色无污染的益生菌，当他的饲料添加剂作用于养殖动物，提高了酶的活性，同时还与乳酸菌、双歧杆菌等有益的菌类共生促进增殖，改善肠道细菌的生态系统，对营养物质的消化吸收以及各种因素导致的肠道疾病有很好的帮助。丁酸梭菌属于严格厌氧菌，它的芽孢对外部环境的适应性较强，在工业上不仅仅可以用来生产储存，在运输过程中，处于高温高压下也具有较高的稳定性。目前相关人员和普通民众对益生菌认知不断提高，市场上难以满足养殖、药物等行业需求，需要优化发酵条件，故此丁酸梭菌的制剂与培养方法满足以上所述需求。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种丁酸梭菌制剂的制备方法。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种丁酸梭菌制剂的制备方法包括以下步骤：

(1)将枸杞、莲子心、天门冬、红芪，在60-80℃下烘干1-2h，粉碎、过筛，把浸泡在体积分数为30％乙醇的中药中药倒入萃取釜，然后放入超临界设备中，温度控制在20-50℃，压力在5-25MPa，CO₂流量为20-30kg/h，向设备加入CO₂与质量分数为98％的夹带剂乙醇，夹带剂流速为0.2-0.6mL/min，萃取1-3h，得到中草药提取液；

(2)将中草药提取液、麦麸、100mL的无菌蒸馏水混匀，水浴加热至50-80℃，时间在10-20min，过滤掉多余的50mL无菌蒸馏水，把丁酸梭菌菌株加入到无菌蒸馏水中，在35-40℃下培养24-36h，得到丁酸梭菌制剂。

优选的，所述步骤(1)中枸杞、莲子心、天门冬、红芪的质量比为15-66:17-35:12-30:5-20。

优选的，所述步骤(2)中草药提取液、麦麸、丁酸梭菌的质量比为1:0.107-0.089:0.006-0.019。

优选的，所述丁酸梭菌的培养方法包括以下步骤：取酒窖底泥10-15g，加入无菌水后，水浴加热至70-90℃，保持10-20min，与碳源、氮源、FeSO₄、K₂HPO₄、NaCl、MgSO₄、CaCO₃一同放进培养基后，35-45℃厌氧培养48-60h，再放进梭菌选择性液体培养基里，35-45℃富集培养48-60h，梯度稀释好以后，将培养液涂布在平板上，置于厌氧培养罐，保持温度在35-45℃下培养48-60h，利用亨盖特滚管技术方法分离单菌落，最后经过生理生化鉴定与16rDNA序列鉴定，得到丁酸梭菌菌株。

优选的，所述权利要求4碳源包括葡萄糖、麦芽糖、甘油、可溶性淀粉中的一种。

优选的，所述权利要求4氮源包括蛋白胨、酵母浸粉、牛肉膏、大豆蛋白胨、胰蛋白胨中的一种。

(三)有益的技术效果

与现有技术相比，本发明具备以下有益技术效果：