[发明专利]一种水产用丁酸梭菌的培养方法及其制剂的制备方法

权利要求书

1.一种丁酸梭菌制剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法为：

(1)将枸杞、莲子心、天门冬、红芪，在60-80℃下烘干1-2h，粉碎、过筛，把浸泡在体积分数为30％乙醇的中药中药倒入萃取釜，然后放入超临界设备中，温度控制在20-50℃，压力在5-25MPa，CO₂流量为20-30kg/h，向设备加入CO₂与质量分数为98％的夹带剂乙醇，夹带剂流速为0.2-0.6mL/min，萃取1-3h，得到中草药提取液；

(2)将中草药提取液、麦麸、100mL的无菌蒸馏水混匀，水浴加热至50-80℃，时间在10-20min，过滤掉多余的50mL无菌蒸馏水，把丁酸梭菌菌株加入到无菌蒸馏水中，在35-40℃下培养24-36h，得到丁酸梭菌制剂。

2.根据权利要求1所述的水产用丁酸梭菌制剂的制备方法，其特征在于：所述(1)中枸杞、莲子心、天门冬、红芪的质量比为15-66:17-35:12-30:5-20。

3.根据权利要求1所述的丁酸梭菌制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中草药提取液、麦麸、丁酸梭菌的质量比为1:0.107-0.089:0.006-0.019。

4.根据权利要求1所述的丁酸梭菌制剂的制备方法，其特征在于：丁酸梭菌的培养方法包括以下步骤：取酒窖底泥10-15g，加入无菌水后，水浴加热至70-90℃，保持10-20min，与碳源、氮源、FeSO₄、K₂HPO₄、NaCl、MgSO₄、CaCO₃一同放进培养基后，35-45℃厌氧培养48-60h，再放进梭菌选择性液体培养基里，35-45℃富集培养48-60h，梯度稀释好以后，将培养液涂布在平板上，置于厌氧培养罐，保持温度在35-45℃下培养48-60h，利用亨盖特滚管技术方法分离单菌落，最后经过生理生化鉴定与16rDNA序列鉴定，得到丁酸梭菌菌株。

5.根据权利要求4所述的丁酸梭菌制剂的制备方法，其特征在于：所述碳源包括葡萄糖、麦芽糖、甘油、可溶性淀粉中的一种。

6.根据权利要求4所述的丁酸梭菌制剂的制备方法，其特征在于：所述氮源包括蛋白胨、酵母浸粉、牛肉膏、大豆蛋白胨、胰蛋白胨中的一种。