[发明专利]脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子的制备方法

权利要求书

1.脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、称取适量的脱脂面粉：电子秤等称量设备称取适量的脱脂面粉；

步骤二、获得脱脂麦胚蛋白：脱脂面粉经过碱溶等电点沉淀法提取脱脂麦胚蛋白；

步骤三、提取脱脂麦胚蛋白多肽：将获取的脱脂麦胚蛋白进一步使用链蛋白酶进行酶解提取脱脂麦胚蛋白多肽；

步骤四、选取包裹材料：选取分子式为(C₆H₁₁NO₄)n，分子量为20kDa，脱乙酰度90％的壳聚糖作为包裹材料；

步骤五、选取交联剂：选取三聚磷酸钠作为交联剂；

步骤六、制备纳米粒子：将脱脂麦胚蛋白多肽和壳聚糖和交联剂混合，制备脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子。

2.根据权利要求1所述的脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子的制备方法，其特征在于：所述步骤三中提取的脱脂麦胚蛋白多肽的大小在33kDa。

3.根据权利要求1所述的脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子的制备方法，其特征在于：所述步骤五中所制得的脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子进行表征测定，得到直径均在60-90nm范围内的球形脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子，所述脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子溶液放置在冷冻干燥机中冻干，将平皿中的固体放在研钵里面研磨后得到粉末状物质。

4.根据权利要求1所述的脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子的制备方法，其特征在于：所述步骤五中所制得的脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子溶液为均一、呈淡蓝色的混悬液，4℃下，脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子有良好的长期保存效果，说明脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子适合在低温4℃下保存。

5.根据权利要求1所述的脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子的制备方法，其特征在于：所述步骤五中所制得的脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子在模拟胃液中释放量极少，而在模拟肠液中可以释放大量脱脂麦胚蛋白多肽，释放率达到了50.54％，所述脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子能够在胃液中保持稳定，在肠液中达到释放的效果。

6.根据权利要求1所述的脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子的制备方法，其特征在于：所述步骤三中脱脂麦胚蛋白多肽进行了细胞活力及代谢能力的测定，使用CCK-8以及LDH试剂盒检测脱脂麦胚蛋白多肽的细胞毒性及细胞活力，结果表明脱脂麦胚蛋白多肽的浓度在0.125-1mg/mL时小鼠小肠上皮细胞系细胞存活率显著升高，而当脱脂麦胚蛋白多肽的浓度达到4mg/mL时，细胞的活力呈现下降趋势，当小鼠小肠上皮细胞系细胞中加入0.25-0.5mg/mL脱脂麦胚蛋白多肽时，细胞的代谢显著增加。

7.根据权利要求1所述的脱脂麦胚蛋白多肽壳聚糖纳米粒子的制备方法，其特征在于：所述步骤三中脱脂麦胚蛋白多肽进行了细胞黏附试验，小鼠小肠上皮细胞系细胞培养一段时间后加入O157:H7细菌，并加入脱脂麦胚蛋白多肽在0.2、0.4、0.8、1.6mg/mL浓度梯度，共培养1h，结果发现，1.6mg/mL的脱脂麦胚蛋白多肽能够显著减少小鼠小肠上皮细胞系细胞周围O157:H7的黏附。