[发明专利]一种ELBD靶向肽的突变体与应用

说明书

本发明公开了一种ELBD靶向肽的突变体与应用，所述ELBD靶向肽的突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示。本发明的ELBD靶向肽及其突变体可以应用于疾病诊断，治疗药物，定向递送，定向降解消除等各种场景，开发成靶向治疗药物，用于相关疾病的治疗。靶向肽引入到纳米抗体上，可以使得纳米抗体具有多靶向结合性，适用于更多的临床应用场景。靶向肽和dsRBD融合，可以将治疗用RNA分子定向递送到特定的靶细胞中，影响细胞的生物学功能，治疗各种疾病。靶向肽与IgG结合结构域偶联后，可以利用抗体特异性结合抗原分子的特性，将原本在胞外的靶标分子内吞拖入细胞内，通过胞内溶酶体的消化降解作用，实现与PROTAC技术类似的定向降解消除效果。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及ELBD靶向肽的突变体与应用。

背景技术

靶向肽是一种能够特异性地引导和运输与其偶合的被转运分子(通常为蛋白质、核酸、纳米颗粒等)到细胞特定区域的短肽。这些细胞的特定区域包括细胞膜的特定部位、细胞核、线粒体、内质网(ER)、高尔基体、溶酶体、过氧化物酶体等。靶向肽在医学上经常被用于运输药物分子到特定靶部位(细胞、组织、器官)，使得药物分子在作用部位的浓度更集中，减少药物的不良反应，提高药物的药理作用效果。在肿瘤治疗过程中，应用靶向肽可以减少化疗药物的使用量，降低化疗药物在正常组织中的浓度，增加在肿瘤细胞中的浓度，从而降低药物引起的不良反应，改善肿瘤治疗的效果。靶向肽在与可被检测的识别标记物(荧光物质、同位素\放射性物质等)偶联后也用于肿瘤的诊断和作为手术治疗的辅助手段。

纳米抗体是一种从在羊驼外周血液中发现的分子量较小的抗原结合片段(～15kDa)，这种抗体只包含一个重链可变区(VHH)和两个常规的CH2与CH3区。

纳米抗体具有体积小、溶解性好、稳定性好、可在深层组织中渗透，具有常规抗体所不具备的特性。由于这些特性，纳米抗体可以配制成保质期长的即用型溶液。纳米抗体单结构域的特点使得其可以通过噬菌体展示技术快速方便地筛选针对特定识别位点的纳米抗体。此外，纳米抗体相对容易在细菌、酵母或哺乳动物细胞中生产，能够以合理的成本进行大规模生产。纳米抗体可以用于在细胞中进行基因编码、标记和表达，用于靶蛋白的体内定位和功能研究。目前基于纳米抗体的治疗可采用三种不同的策略：①作为靶受体位点的拮抗剂/掩蔽剂，抑制阻断或影响受体的功能；②作为针对某一抗原的靶向结构域，携带偶联的药物/功能结构域专一性靶向递送；③作为纳米颗粒/脂质体表面的靶向分子，将纳米颗粒/脂质体导向靶部位。纳米抗体已成为一种很有前途的疾病诊断和治疗工具。同样，在纳米抗体上引入其它靶向肽序列，可以使得纳米抗体具有多靶向结合性，适用于更多的临床应用场景。

许多与高度结构化的RNA相互作用的蛋白质都包含双链RNA结合序列(dsRBD)，这些蛋白包括核酸酶RNase III、Dicer、蛋白激酶PKR、RNA脱氨酶(ADAR)和Staufen(一种负责mRNA定位的蛋白质)。双链RNA结合蛋白(DRBP)具有一个相同的进化保守序列，可与dsRNA发生相互作用。据报道，含有dsRNA结合域(dsRBD)的蛋白质可与低至11bp的dsRNA结合，而且这种结合大部分与具体的核苷酸序列无关。不过，确实有几种dsRBD显示出了高度的底物特异性，这可能具有重要的生物学意义。现已报道鉴定了20多个DRBP，这些蛋白参与无数细胞功能，从RNA干扰到抗病毒机制和其他类型的转录后基因调控，它们在细胞中发挥着多种至关重要的作用。

将靶向穿膜肽序列和dsRBD融合，可以将治疗用RNA分子定向递送到特定的靶细胞中，影响细胞的生物学功能，治疗各种疾病。

由链球菌或者金黄色葡萄球菌来源的可结合抗体分子的蛋白结构域早已被大量用于单克隆抗体的分离纯化和大规模商业化生产。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了ELBD靶向肽的突变体与应用，本发明的ELBD靶向肽及其突变体可以应用于疾病诊断，治疗药物，定向递送，定向降解消除等各种场景，开发成靶向治疗药物，用于相关疾病的治疗。