[发明专利]中甸百脉根快速繁殖方法及应用

权利要求书

1.中甸百脉根快速繁殖方法，其特征在于，步骤包括：

（1）外植体选择与消毒：选择正常生长、无病无害的中甸百脉根幼苗叶片为外植体，用洗洁剂清洗干净，再用自来水冲洗，然后转至超净工作台上，用75%的乙醇溶液消毒3-5 s，无菌水洗2-3次，利用0.1%升汞溶液消毒5-8 min，再用无菌水清洗3次，置于滤纸上晾干备用；

（2）愈伤组织诱导：将消毒好的叶片剪成0.5cm²大小，接种至愈伤组织培养基中，控制pH为5.8，培养温度25±2℃，光照12-14 h/d、光强度2000Lx，培养6-8天使叶片切口处均长出紧密的乳白色愈伤组织；

所述愈伤组织培养基配方为：1/2MS或MS+2,4-D 2.0-3.0mg/L+6-BA 0.5- 1.0mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂；

（3）不定芽分化：愈伤组织继续在上述培养基和培养条件下继续培养10-15天，使愈伤组织分化出小芽；

（4）芽的壮苗培养：分化出的不定芽连同愈伤组织切下，接入壮苗培养基中，pH为5.8培养15-20天使芽高为5-8 cm；

所述壮苗培养基配方为：1/2MS或MS+6-BA 0.5-1.0mg/L+NAA 0.3-0.5mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂；

（5）生根培养：将步骤（4）培壮后的小苗单株切下，接入生根培养基中，pH为5.8，温度为25±2℃，光照时间为12 h/d，光照强度为2000 Lx，继续培养20-30天使幼苗生长出3-4cm长的不定根；

所述生根培养基配方为：1/2MS+NAA 0.5-1.0mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂。

2.根据权利要求1所述方法在中甸百脉根快速繁殖中的应用。