[发明专利]亚胺还原酶突变体及其在合成手性四氢异喹啉中的应用

权利要求书

1.亚胺还原酶突变体，其中，所述突变体选自如下(I)-(IV)组成的组中的任一项：

(I)所述亚胺还原酶突变体和SEQ ID NO.1所示的序列相比，在对应于SEQ ID NO:1所示序列的第172、173、235、267位中的一个或多个位置处包含突变；

(II)与(I)所示序列具有至少98％的序列同一性，且不包括SEQ ID NO:1所示序列的突变体；

(III)由多核苷酸编码的突变体，所述多核苷酸在非常高严格条件下与(a)或(b)所示的多核苷酸杂交：

(a)编码如(I)所示氨基酸序列的突变体的多核苷酸；

(b)(a)的全长互补多核苷酸；

(IV)由(I)、(II)或(III)任一项所示的突变体的片段，并且，所述片段仍然具有亚胺还原酶活性。

2.根据权利要求1所述的亚胺还原酶突变体，其中，所述突变体对应SEQ ID NO:1所示序列的第172位的氨基酸由亮氨酸(L)突变为半胱氨酸(C)、甲硫氨酸(M)、色氨酸(W)或丝氨酸(S)，优选突变为半胱氨酸(C)或甲硫氨酸(M)；和/或，

所述突变体对应SEQ ID NO:1所示序列的第173位的氨基酸由天冬氨酸(D)突变为丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、甘氨酸(G)、亮氨酸(L)、丙氨酸(A)或谷氨酸(E)，优选突变为亮氨酸(L)或丝氨酸(S)；和/或，

所述突变体对应SEQ ID NO:1所示序列的第235位的氨基酸由苏氨酸(T)突变为亮氨酸(L)、缬氨酸(V)或丝氨酸(S)，优选突变为丝氨酸(S)；和/或，

所述突变体对应SEQ ID NO:1所示序列的第267位的氨基酸由酪氨酸(Y)突变为苯丙氨酸(F)。

3.根据权利要求1或2所述的亚胺还原酶突变体，其中，所述亚胺还原酶突变体为包含如下(c)～(q)中至少一项所示的突变的突变体：

(c)对应SEQ ID NO:1所示序列的第172位的氨基酸由亮氨酸(L)突变为半胱氨酸(C)；

(d)对应SEQ ID NO:1所示序列的第172位的氨基酸由亮氨酸(L)突变为甲硫氨酸(M)；

(e)对应SEQ ID NO:1所示序列的第173位的氨基酸由天冬氨酸(D)突变为亮氨酸(L)；

(f)对应SEQ ID NO:1所示序列的第173位的氨基酸由天冬氨酸(D)突变为丝氨酸(S)；

(g)对应SEQ ID NO:1所示序列的第235位的氨基酸由苏氨酸(T)突变为丝氨酸(S)；

(h)对应SEQ ID NO:1所示序列的第267位的氨基酸由酪氨酸(Y)突变为苯丙氨酸(F)；

(i)对应SEQ ID NO:1所示序列的第172位的氨基酸由亮氨酸(L)突变为半胱氨酸(C)，且第173位的氨基酸由天冬氨酸(D)突变为丝氨酸(S)；

(j)对应SEQ ID NO:1所示序列的第172位的氨基酸由亮氨酸(L)突变为半胱氨酸(C)，且第235位的氨基酸由苏氨酸(T)突变为丝氨酸(S)；

(k)对应SEQ ID NO:1所示序列的第172位的氨基酸由亮氨酸(L)突变为半胱氨酸(C)，且第267位的氨基酸由酪氨酸(Y)突变为苯丙氨酸(F)；

(l)对应SEQ ID NO:1所示序列的第172位的氨基酸由亮氨酸(L)突变为甲硫氨酸(M)，且第267位的氨基酸由酪氨酸(Y)突变为苯丙氨酸(F)；

(m)对应SEQ ID NO:1所示序列的第172位的氨基酸由亮氨酸(L)突变为甲硫氨酸(M)，第173位的氨基酸由天冬氨酸(D)突变为亮氨酸(L)，且第267位的氨基酸由酪氨酸(Y)突变为苯丙氨酸(F)；

(n)对应SEQ ID NO:1所示序列的第172位的氨基酸由亮氨酸(L)突变为甲硫氨酸(M)，第235位的氨基酸由苏氨酸(T)突变为丝氨酸(S)，且第267位的氨基酸由酪氨酸(Y)突变为苯丙氨酸(F)；

(o)对应SEQ ID NO:1所示序列的第172位的氨基酸由亮氨酸(L)突变为半胱氨酸(C)，第235位的氨基酸由苏氨酸(T)突变为丝氨酸(S)，且第267位的氨基酸由酪氨酸(Y)突变为苯丙氨酸(F)；

(p)对应SEQ ID NO:1所示序列的第172位的氨基酸由亮氨酸(L)突变为甲硫氨酸(M)，第173位的氨基酸由天冬氨酸(D)突变为亮氨酸(L)，第235位的氨基酸由苏氨酸(T)突变为丝氨酸(S)，且第267位的氨基酸由酪氨酸(Y)突变为苯丙氨酸(F)；

(q)对应SEQ ID NO:1所示序列的第172位的氨基酸由亮氨酸(L)突变为甲硫氨酸(M)，第173位的氨基酸由天冬氨酸(D)突变为丝氨酸(S)，第235位的氨基酸由苏氨酸(T)突变为丝氨酸(S)，且第267位的氨基酸由酪氨酸(Y)突变为苯丙氨酸(F)。