[发明专利]拉莫三嗪完全抗原和抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了拉莫三嗪完全抗原及其在拉莫三嗪抗体制备和免疫法检测中的应用。所述拉莫三嗪完全抗原的结构如式1所示式1。本发明还公开了用该完全抗原制备的抗拉莫三嗪单克隆抗体，产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞以及用于检测拉莫三嗪类似物的检测卡和检测试剂盒。本发明公开了检测拉莫三嗪类似物的ELISA法和荧光免疫层析法，其中荧光免疫层析法操作简单、检测时间短、成本低、特异性高、重复性好。

技术领域

本发明涉及精神类药物的检测；具体地说，本发明涉及拉莫三嗪完全抗原、利用该完全抗原获得拉莫三嗪单克隆抗体及其在荧光免疫层析法检测拉莫三嗪类似物中的应用。

背景技术

拉莫三嗪(Lamotrigine，LTG)的开发是最早的合理抗癫痫药物(AED)开发尝试之一。20世纪70年代，作为发现新的AEDs的合理方法的一部分，首次合成了LTG，其依据是观察到许多现有的AEDs是叶酸拮抗剂。但作为一种苯三嗪，拉莫三嗪在化学上与任何现有的AEDs无关。1993年3月，食品药物管理局(FDA)询委员会建议LTG在美国销售。与经典抗癫痫药相比，拉莫三嗪具有耐受性良好、酶诱导和酶抑制不明显、妊娠期毒性较小等优点。拉莫三嗪在肠道内吸收迅速、完全，口服生物利用度接近100％，半衰期在24.1至35小时之间，但可能通过酶诱导和抑制药物改变。患者的体重、年龄、合并用药、基因多态性等均会对拉莫三嗪的药代动力学产生影响，造成药物在不同个体间的差异较大。根据1994至2010年《中国医院知识数据库》中拉莫三嗪不良反应文献检索结果，LTG导致的不良反应包括皮肤损害、血液系统损害、中枢及神经系统损害、消化系统不良反应和诱发自身免疫性疾病及致畸等。综上所述，为了进一步优化和规范拉莫三嗪在不同人群中的使用，根据患者的病理生理情况调整给药方案，有必要对特定人群进行拉莫三嗪血药浓度监测(therapeutic drugmonitoring，TDM)。

目前拉莫三嗪的检测主要包括液相色谱与质谱联用法(HPLC-MS)，高效液相色谱等，仪器昂贵，操作复杂且耗时。荧光定量免疫层析技术，是结合免疫荧光技术和传统免疫层析技术相优点的新型定量检测技术。该技术操作灵活简便、成本较低、反应时间短，能做到及时定量检测。能及时为医师对病人调整用药提高数据支撑，达到个体化给药的目的，确保疗效的同时保证了用药安全性。

发明内容

本发明的技术目的是为了克服以上技术问题，提供一种操作简单、检测时间短、成本低、特异性高、重复性好的拉莫三嗪完全抗原、利用该完全抗原获得拉莫三嗪单克隆抗体及其在荧光免疫层析法检测拉莫三嗪类似物中的应用。

本发明的技术目的通过以下技术方案实现：

一种拉莫三嗪完全抗原，所述完全抗原具有式1所示的结构：

其中，Protein为蛋白质载体。

一种制备权利要求1所述拉莫三嗪完全抗原的方法，所述方法包括步骤：

(1)将拉莫三嗪半抗原与牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)连接，以制得所述的拉莫三嗪完全抗原；

(a)使拉莫三嗪半抗原用N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解为A液；

(b)将步骤(a)得到的A液、25-25％戊二醛加入至BSA/OVA溶液中，室温反应1.5-2.5h，制得拉莫三嗪-BSA/OVA偶联物，即拉莫三嗪完全抗原。

一种拉莫三嗪完全抗原的用途，其用于制备拉莫三嗪的特异性单克隆抗体。

一种单克隆抗体，所述单克隆抗体特异性结合拉莫三嗪；所述单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系产生。

一种单克隆抗体，所述杂交瘤细胞系由中国典型培养物保藏中心(CCTCC，中国，武汉，武汉大学)保藏，保藏号为CCTCC NO:C2022381。