[发明专利]用于鸡圆圈病毒AGV2、GyV3、GyV7鉴别诊断的多重PCR引物组及试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于鸡圆圈病毒AGV2、GyV3、GyV7鉴别诊断或检测的多重PCR引物组及其试剂盒，所述引物组的序列如SEQ ID NO.1‑4所示，所述试剂盒包括所述的引物组，本发明通过分析AGV2、GyV3和GyV7基因组结构特征，综合利用多种生物信息学工具，巧妙设计引物获得用于AGV2、GyV3和GyV7鉴别诊断的引物组，组装成可用于AGV2、GyV3和GyV7鉴别诊断的试剂盒，该试剂盒简便快速，可同时对AGV2、GyV3和GyV7感染情况进行科学鉴别诊断；特异性强，对常见鸡传染病(如产蛋下降综合征病毒、禽4型腺病毒、禽流感病毒H9、鸡新城疫病毒等)均无交叉。

技术领域

本发明属于禽传染病学领域，具体涉及一种用于鸡圆圈病毒AGV2、GyV3、GyV7鉴别诊断的多重PCR引物组及其试剂盒。

背景技术

圆圈病毒Gyrovirus(GyVs)为单链环状DNA病毒，该病毒属过去只有一个成员，即鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus，CIAV)，2011年以来，研究人员陆续分离到9种与CIAV基因结构类似的病毒。圆圈病毒的宿主较广泛，宿主有鸡、人和野鸟，有的圆圈病毒既可感染鸡也可以感染人。该病毒属曾经属于圆环病毒科(Circoviridae)，由于圆圈病毒在结构上和遗传信息上均与细环病毒科(Anelloviridae)成员更加相似，因此2016年国际病毒分类委员会批准的最新病毒分类法，GyVs被重新分配到细环病毒科家族。圆圈病毒属可以分为三个分支，分别是包含CIAV、HGyV/AGV2、GyV3、GyV6、GyV7和GyV9的A分支；包含GyV4和GyV5的B分支；以及包含GyV8的C分支。圆圈病毒基因组约2.2～2.4kb，由5’端的非编码区和3个重叠的开放阅读框(ORF)组成。三个重叠的ORF分别编码结构蛋白VP1，骨架蛋白VP2以及凋亡蛋白VP3。

2011年，有研究者从健康法国成年人的皮肤表面分离到了人的GyVs(Human GyVs，HGyV)；同一年，从表现为精神沉郁、体重减轻的巴西某患病鸡群的血清中也分离到了一种GyVs，即鸡的GyVs2(Avian GyV2，AGV2)，该病毒与CIAV只有40％的同源性，其VP1、VP2和VP3蛋白的氨基酸序列与CIAV相应蛋白的同源性分别为38.8％、40.3％和32.2％。2012年有研究人员在腹泻患者的粪便中检测到了HGyV，并且检出率为1-9.3％。研究指出，HGyV与AGV2密切相关，HGyV和AGV2的VP1-3蛋白质序列差异性仅为3-7％，表明HGyV与AGV2属于同一种病毒。2012年有研究者首次从智利急性胃肠炎的儿童粪便中分离鉴定出人源GyV3。2018年我国学者首次从患有典型鸡传染性腺胃炎的病鸡腺胃中鉴定出GyV3。又有研究通过鸡和小鼠致病性试验证实：GyV3可引起鸡的传染性腺胃炎和贫血，并且可跨种感染小鼠，引起小鼠胃肠炎和贫血。GyV3的基因组约包含2356个碱基序列，与其他GyVs具有相似的基因组结构，其VP1和VP2蛋白与HGyV/AGV2相应蛋白的氨基酸序列的同源性分别为62％和63％，与其他的已知GyVs VP3氨基酸序列具有57％的相似性。最近，在被感染的鸡的体内检测到GyV7，基因组为2439bp，非编码区514bp，其VP1、VP2和VP3蛋白的氨基酸序列与GyV7相应蛋白的同源性最高分别为49％、53％和63％。

AGV2、GyV3和GyV7是近年来在鸡群中新发现的病毒，这3种病毒共感染的情况在鸡中比较常见。但是，当前尚未见可同时对3种新发鸡圆圈病毒AGV2、GyV3和GyV7进行多重PCR鉴别检测方法的研究报道，本发明的建立可填补国内外相关领域空白。本发明建立的多重PCR检测方法能够对鸡群中流行的AGV2、GyV3和GyV7的进行鉴别诊断，为鸡群中开展新发AGV2、GyV3和GyV7病毒的流行病学调查及后续科学防控相关疾病奠定基础，具有十分重要的研究意义。

发明内容

本发明的目的在于提供用于鸡圆圈病毒AGV2、GyV3、GyV7鉴别诊断的多重PCR引物组及其试剂盒，可同时对鸡圆圈病毒AGV2、GyV3、GyV7的感染情况进行科学鉴别诊断或检测。

本发明的目的通过如下技术方案实现：