[发明专利]一种细菌抗原检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种金黄色葡萄球菌β溶血素抗原表位多肽和抗该表位的单克隆抗体，所述的单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了一种检测金黄色葡萄球菌β溶血素的试剂盒，所述试剂盒包括有效量的单克隆抗体、金黄色葡萄球菌β溶血素突变体蛋白、金黄色葡萄球菌β溶血素突变体蛋白多克隆抗体以及配套的检测试剂。本发明制备的抗原表位多肽具有良好的免疫原性和特异性；本发明制备的单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性；使用本发明的单克隆抗体制备的诊断试剂盒具有良好的特异性、敏感性和准确性。

技术领域

本发明属于生物诊断技术领域，具体涉及一种细菌抗原检测试剂盒及其应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)也称“金葡菌”，隶属于葡萄球菌属，是革兰氏阳性菌代表，为一种常见的食源性致病微生物。该菌最适宜生长温度为37℃，pH为7.4，耐高盐，可在盐浓度接近10％的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口中，空气、污水等环境中也无处不在。

金黄色葡萄球菌形态为球形，在培养基中菌落特征表现为圆形，菌落表面光滑，颜色为无色或者金黄色，无扩展生长特点，将金黄色葡萄球菌培养在哥伦比亚血平板中，在光下观察菌落会发现周围产生了透明的溶血圈。金黄色葡萄球菌在显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。

金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，广泛存在于自然环境中。金黄色葡萄球菌在适当的条件下，能够产生肠毒素，引起食物中毒。金黄色葡萄球菌引发的食物中毒报道层出不穷，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占食源性微生物食物中毒事件的25％左右，金黄色葡萄球菌成为仅次于沙门氏菌和副溶血杆菌的第三大微生物致病菌。

金葡菌可产生多种毒素。β溶血素(亦称β-toxin)就是其毒素之一，它具有白细胞毒性、溶血活性等特性。β溶血素是由330个氨基酸组成的单链多肽，分子量为37～39kDa，其等电点(pI)高于9。β溶血素是一种镁依赖神经酯酶，具有磷脂酶C(PhospholipaseC，PLC)活性，可以分解甘油磷酸胆碱，β溶血素依靠这种酶活性，水解组成细胞膜的磷脂双分子层，从而破坏细胞膜的完整性，导致细胞裂解，引起溶血。引用自发明专利(CN 105641689 A)；其对金葡菌的β溶血素进行了研究，并在此基础上制备了金葡菌的亚单位疫苗。但是，目前缺少对β溶血素进行检测的试剂或原辅材料。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的之一，提供一种金黄色葡萄球菌β溶血素的单克隆抗体及其制备方法；本发明的目的之二，提供了一种使用本发明制备的金黄色葡萄球菌β溶血素单克隆抗体制备金黄色葡萄球菌β溶血素检测试剂盒。

因此，本发明一方面提供了一种金黄色葡萄球菌β溶血素的单克隆抗体，所述的单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

优选地，本发明所述的单克隆抗体特异性结合的金黄色葡萄球菌β溶血素的抗原表位多肽的的氨基酸序列为TQSEDSRCGAGHDRKIRAEQMKEIS。

再一方面，本发明还提供了一种检测金黄色葡萄球菌β溶血素的试剂盒，所述试剂盒包括有效量的单克隆抗体、金黄色葡萄球菌β溶血素突变体蛋白、金黄色葡萄球菌β溶血素突变体蛋白多克隆抗体以及配套的检测试剂。

优选地，本发明所述的单克隆抗体作为检测抗体，所述检测抗体在使用前用HRP进行标记，所述的HRP标记的单克隆抗体在使用时稀释20000倍。

优选地，本发明所述的金黄色葡萄球菌β溶血素突变体蛋白作为标准品，所述标准品的浓度分别为1μg/ml、0.5μg/ml、0.25μg/ml、0.125μg/ml、0.0625μg/ml、0.03125μg/ml、0μg/ml。