[发明专利]特异性结合CLL1蛋白的单域抗体及其应用

说明书

本发明公开了特异性结合CLL1蛋白的单域抗体及其应用。具体地公开了氨基酸序列为SEQ ID No.1的单域抗体。该单域抗体亲和力高，能够很好地特异性靶向CLL1阳性细胞，能有效地促进NK细胞分泌IFNγ，激活NK细胞的效应功能，还能显著诱导NK细胞的细胞毒性作用，具有较强的特异性杀伤CLL1阳性细胞的能力。本发明的单域抗体可制成临床上预防或治疗CLL1靶点相关疾病的药物，也可用于制备靶向CLL1的CAR细胞，或CLL1蛋白的检测试剂盒。本发明单域抗体药物结构稳定、分子小、易于重组表达、生产成本低，可单独使用或作为载药系统携带相关药物，在药物应用和临床诊断等领域具有十分广阔的前景和重要的意义。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及特异性结合CLL1蛋白的单域抗体及其应用。

背景技术

急性髓细胞白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是造血系统的髓系原始细胞克隆性恶性增殖性疾病，是一个具有高度异质性的疾病群，它可以由正常髓系细胞分化发育过程中不同阶段的造血祖细胞恶性变转化。长期以来，一直采用蒽环类和阿糖胞苷化疗来治疗轻度患者，使用造血干细胞移植来治疗中、高危患者。急性髓细胞白血病的异质性导致目前对于AML患者的治疗仍是一种挑战。近年来，研究人员发现，以CLL1为靶点的免疫靶向疗法治疗AML的效果显著。C型凝集素样分子1(C-type lectin-like molecule 1，CLL1)也称为C型凝集素结构域家族12成员A(C-type lectin domain family 12member A，CLEC12A)，是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白，作为抑制性受体在免疫调节中发挥重要作用。CLL1存在于外周血和骨髓的髓系细胞以及大部分AML细胞中，同时表达于多数AML的CD34⁺CD38^-干细胞上，正常人的CD34⁺CD38^-干细胞则不表达，CLL1因其特殊的表达模式成为AML治疗和诊断的潜在靶点。此外，CLL1还在骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic Syndromes，MDS)和慢性髓细胞白血病(Chronic Myeloid Leukemia，CML，慢性粒细胞白血病)细胞上表达。

抗体是抗原刺激B细胞分化增殖为浆细胞后合成和分泌的、能与抗原发生特异性结合并具有多种免疫功能的球蛋白。抗体同抗原的特异性结合能力使其在疾病诊断和免疫防治中具有重要意义。由抗体物质(包括具有治疗功能的全抗体分子和抗体片段)组成的抗体药物是靶向治疗的重要手段之一，已经成为目前生物医药产业最有前景和应用价值的热点领域。然而抗体药物由于分子量大、抗原性强的问题阻碍了其在医药领域的广泛应用。

重链抗体(Heavy chain antibody，HcAb)是天然存在的一种抗体类型，是骆驼科动物或软骨鱼类所具有的独特抗体类型，其抗体结构域天然缺失轻链，只由两条重链组成。重链抗体的抗原识别功能主要由重链抗体的可变区(VHH)决定。单独的VHH即可以识别抗原，因此其又被称为单域抗体(Single-domain antibody，sdAb)。单域抗体缺失抗体轻链，只有重链可变区，因其分子量小，也被称为纳米抗体(Nanobody，Nb)。单域抗体的分子量只有约13-15KDa，直径约为2.5nm，长4nm，是迄今为止最小的具有抗原结合功能的抗体片段，其与抗原结合的能力及其稳定性同完全抗体基本一致或具有更高的特异性抗原亲和力。与传统抗体相比，单域抗体还具有许多独特的性质，比如稳定性好、可抵达特殊抗原表位、可砌块模式任意组合、生产成本低等。获得单域抗体的常规方法由多次免疫骆驼科动物、B淋巴细胞分离、VHH区扩增、展示文库构建和筛选等众多步骤构成。随着合成生物学的发展，构建基于全合成的高质量随机化大容量单域抗体库成为可能。目前，VHH单域抗体因其结构稳定、分子小、溶解性好、耐受各类不良环境、制剂稳定性好、易于重组表达、易于人源化等优点，已经被广泛使用在小型化基因工程抗体研究、新药开发以及疾病的诊断治疗上。单域抗体的研究和开发在药物应用和临床诊断等领域具有十分广阔的前景，抗体的微型化对抗体药物的发展具有重要的意义。

发明内容