本发明公开了特异性结合CLL1蛋白的单域抗体及其应用。具体地公开了氨基酸序列为SEQ ID No.1的单域抗体。该单域抗体亲和力高，能够很好地特异性靶向CLL1阳性细胞，能有效地促进NK细胞分泌IFNγ，激活NK细胞的效应功能，还能显著诱导NK细胞的细胞毒性作用，具有较强的特异性杀伤CLL1阳性细胞的能力。本发明的单域抗体可制成临床上预防或治疗CLL1靶点相关疾病的药物，也可用于制备靶向CLL1的CAR细胞，或CLL1蛋白的检测试剂盒。本发明单域抗体药物结构稳定、分子小、易于重组表达、生产成本低，可单独使用或作为载药系统携带相关药物，在药物应用和临床诊断等领域具有十分广阔的前景和重要的意义。
本发明公开了CLL1‑CAR‑T细胞及其制备方法与应用。具体地公开了CLL1‑CAR‑T细胞，其含有嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括单域抗体、铰链区、跨膜区和胞内信号区，所述单域抗体的氨基酸序列为SEQ ID No.1的第22‑150位。本发明CLL1‑VHH‑1CAR‑T细胞能够很好地分泌T细胞特异性效应分子IFN‑γ，有效地特异性杀伤CLL1+靶细胞，具有良好的体内杀瘤活性，不仅可以显著抑制肿瘤细胞在小鼠体内的增殖，还能显著延长小鼠的生存时间。本发明CLL1‑VHH‑1CAR‑T细胞抗肿瘤能力好，可用于CLL1靶点相关疾病(如急性髓细胞白血病等)的免疫治疗，具有广阔的临床应用前景。
本发明公开了靶向CLL1的CAR‑T细胞及其制备方法与应用。具体地公开了CAR‑T细胞，其含有嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括单域抗体、铰链区、跨膜区和胞内信号区，所述单域抗体的氨基酸序列为SEQ ID No.1的第22‑150位。实验证明，本发明的CLL1‑VHH‑16CAR‑T细胞能够很好地分泌T细胞特异性效应分子IFN‑γ，有效地特异性杀伤CLL1+靶细胞，具有良好的体内杀瘤活性，不仅可以显著抑制肿瘤细胞在小鼠体内的增殖，还能显著延长小鼠的生存时间。本发明的CLL1‑VHH‑16CAR‑T细胞抗肿瘤能力好，可用于CLL1靶点相关疾病的免疫治疗，具有广阔的临床应用前景。
本发明公开了一种辐照CAR‑T细胞及其制备方法与应用。具体地公开了辐照GPC3CAR‑IC细胞，其可按照包括如下步骤的方法制备：用电离射线对GPC3CAR‑IC细胞进行辐照处理得到辐照GPC3CAR‑IC细胞，其含有SEQ ID No.3所示的核酸分子。本发明的辐照GPC3CAR‑IC细胞通过在基因层面改造CAR基因实现了抑制肿瘤微环境的免疫抑制作用，提高了GPC3CAR‑IC细胞的抗肿瘤效果，并且本发明的辐照GPC3CAR‑IC细胞无需进行基因编辑即可降低GVHD风险，具有安全、通用、低成本的特点，可实现大规模工业化生产，对肿瘤的CAR‑T治疗具有广泛的临床应用价值。
本发明公开了含有嵌合抗原受体和嵌合转换开关受体编码基因的融合基因及其应用。具体公开了氨基酸序列是SEQ ID No.1的融合蛋白以及包括嵌合抗原受体和嵌合转换开关受体的编码基因的核酸分子(SEQ ID No.3)。本发明通过设计含有嵌合抗原受体和嵌合转换开关受体编码基因的融合基因，将PD‑L1激活的抑制抗肿瘤T细胞反应转化为CD27介导的激活信号，赋予CAR‑T细胞抵御免疫抑制性肿瘤微环境的能力，并使其具有更强的体内持久性，通过促进细胞因子IFN‑γ和IFN‑α2的分泌来调节肿瘤附近的微环境，解除其免疫抑制性，调动机体自身免疫力参与对肿瘤细胞的杀伤作用，提高了CAR‑T细胞的抗肿瘤效果。
本发明公开了抗CLL1单域抗体及其应用。本发明具体地公开了氨基酸序列为SEQ ID No.1的单域抗体。本发明的单域抗体亲和力高，能够很好地特异性靶向CLL1阳性细胞，可应用于AML患者骨髓细胞中CLL1表达的检测。本发明的单域抗体可制成临床上用于预防和治疗CLL1靶点相关疾病(如急性髓细胞白血病、骨髓增生异常综合征或慢性髓细胞白血病等)的特异性抗体药物，或CLL1蛋白的检测试剂盒等。本发明单域抗体药物结构稳定、分子小、易于重组表达、生产成本低，可单独使用或作为载药系统携带相关药物，在药物应用和临床诊断等领域具有十分广阔的前景和重要的意义。
