[发明专利]一种灵敏度提高的化学发光检测方法及应用、试剂盒

说明书

本发明公开了一种灵敏度提高的化学发光检测方法及应用、试剂盒，检测方法通过信号放大体系提高对待测物的检测灵敏度；所述信号放大体系的获取过程为：将待测物的单克隆抗体链接生物素，得生物素化抗体；向固相载体上链接链霉亲和素抗体；链霉亲和素抗体与链霉亲和素反应，生物素化抗体上的生物素与链霉亲和素反应，获得待测物单克隆抗体链接至固相载体上的信号放大体系。本发明利用在固相载体上链霉亲和素抗体，延展固相载体的表面反应臂，从而消除各个抗体与抗原反应时相互间的干扰，能够有效提高试剂灵敏度，减少抗体用量。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种灵敏度提高的化学发光检测方法及应用、试剂盒。

背景技术

化学发光检测法是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法，使用化学发光技术、抗体标记技术制备试剂组分，通过抗原抗体间的特异性免疫反应实现对待测物的定量检测。

目前采用化学发光检测对待测物定量检测时，是将与待测物结构相似的抗原用缓冲液制备成一定浓度值的校准品(液体或固体)，通过测定校准品制作校准曲线，计算待测物浓度。

现有的化学发光检测方法检测灵敏度较低，为了提高灵敏度，通常会使用大量的抗体，但却提高了成本。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了一种灵敏度提高的化学发光检测方法，并将该方法应用于提高定量检测GFAP试剂盒的灵敏度，还提供了定量检测GFAP的试剂盒，大大提高了检测灵敏度。

本发明的第一个目的在于提供一种灵敏度提高的化学发光检测方法，包括：通过信号放大体系提高对待测物的检测灵敏度；

所述信号放大体系的获取过程为：

将待测物的单克隆抗体链接生物素，得生物素化抗体；

向固相载体上链接链霉亲和素抗体；

链霉亲和素抗体与链霉亲和素反应，生物素化抗体上的生物素与链霉亲和素反应，获得待测物单克隆抗体链接至固相载体上的信号放大体系。

本发明中，通过向固相载体上链接链霉亲和素抗体，然后再与链霉亲和素特异性反应，可将链霉亲和素链接至固相载体上。将待测物单克隆抗体链接生物素，通过生物素与链霉亲和素间的高亲合力，可将待测物单克隆抗体链接至固相载体上。待测物可为GFAP或UCH-L1。

由于生物素与亲和素之间放大效应可提升信号值，但因一个亲和素可结合四个生物素化抗体，使得固相周围空间拥挤，反应受到抑制，尤其在检测大分子物质时，影响更为明显。本发明利用在固相载体上链霉亲和素抗体，延展固相载体的表面反应臂，从而消除各个抗体与抗原反应时相互间的干扰，能够有效提高试剂灵敏度，减少抗体用量。既提升检测性能，又降低成本。

在一可选的实施例中，所述固相载体采用磁珠微粒。

在一可选的实施例中，包括：

(1)制备磁珠组分，所述磁珠组分包括由磁珠、链霉亲和素抗体、链霉亲和素、待测物单克隆抗体1、生物素酯为原料形成的信号放大体系；

(2)制备酶组分；

(3)将磁珠组分、待测物、酶组分孵育，形成免疫复合物，清洗，与底物反应产生光信号，计算待测物浓度。

在一可选的实施例中，所述磁珠组分的制备过程为：

(1)将用缓冲液透析过夜后的待测物单克隆抗体1与生物素酯按比例混合反应，得生物素化抗体；

(2)将磁珠清洗活化后，与链霉亲和素抗体偶联，封闭，磁珠磁分离；

(3)将(2)中磁分离后的磁珠、链霉亲和素、生物素化抗体进行包被；

(4)对包被产物室温封闭，缓冲液清洗，重悬磁珠配制工作液。