[发明专利]一种无血清昆虫培养基及应用

说明书

本发明涉及一种无血清昆虫培养基及应用，属于生物制药技术领域，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂的组分包括：葡萄糖、蛋白水解物、嘌呤类物质、PF68以及细胞因子。本发明昆虫细胞无血清培养基中添加了细胞生长因子，能够支持细胞快速增殖，并且细胞培养后期活率下降速率更慢；本发明的昆虫细胞无血清培养基组分简单明确，易于制备，可长期保存，且对其培养效果无影响，适用性广泛，既可培养Sf‑9和Sf‑21，也可以培养High‑five细胞，能够支持昆虫细胞系的稳定传代和快速增殖，能支持昆虫细胞表达多种重组蛋白。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体地，涉及一种无血清昆虫培养基及应用。

背景技术

昆虫细胞培养基的发展经历了天然培养基、合成培养基和无血清培养基三个阶段。天然培养基采用取自动物体液或从组织中提取的成分作为培养液。合成培养基最大的特点是各种成分已知。无血清培养基是在已知细胞所需营养物质的基础培养基中加入适宜的促细胞生长因子，能够保证细胞生长良好无须补加血清的培养基。昆虫细胞培养基的发展主要是合成培养基的发展。目前已有三种商品化的培养基：Grace培养基、IPL41培养基和TC100培养基。现有的培养基是在分析昆虫血淋巴的化学组成基础上发展和形成的。Wyatt分析了家蚕血淋巴组分后，人工配制了一个由21种氨基酸、5种无机盐、3种有机酸、果糖、海藻糖、葡萄糖所组成的基础培养基，并相应地调节pH值和渗透压。Grace在Wyatt的昆虫培养基中加入9种水溶性的B复合维生素，改进了Wyatt的培养液，并首次建立了无脊椎动物的细胞系桉蚕蛾卵巢细胞系。

已有研究发现在合成培养基中加入动物血清(小牛血清或胎牛血清)，能更有效地促进细胞的生长与繁殖。最初的Grace培养基是将Hink液加入水解乳蛋白和酵母提取物，并用10％已灭活的胎牛血清替代了昆虫血淋巴。Gardiner等对Grace培养基进行了修改并定名为TC100，TC100适合于苜蓿丫蚊夜蛾核型多角体病毒在草地贪夜蛾细胞系(Sf细胞系)中生长，但它仅适用于实验室培养而不适用于大规模生产。Weiss等改进了最初的IPL培养基，研制了新的IPL41培养基，扩大了昆虫细胞的生产规模，有利于昆虫杆状病毒的有效生产。这三种商品化培养基既有粉末状的，又有液体的，在实验室的应用中一般是补加10％的血清用于昆虫细胞培养。但是这三种培养基并不能适合于任何细胞系，不同的昆虫细胞系可能在其中一个培养基中生长较好，因此开发适用性更为广泛、且无需添加血清的昆虫细胞培养基具有广阔的前景。

发明内容

针对背景技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供了一种组分种类少、制备方法简单，且能支持昆虫细胞高密度增殖及产物高表达的无血清昆虫细胞培养基，该无血清昆虫细胞培养基能够支持昆虫细胞系的稳定传代(Sf-9、Sf-21和High Five)，快速增殖和产物的高表达(最高活细胞密度：Sf-9为16.10×10⁶cells/mL，Sf-21为13.52×10⁶cells/mL，High-five为13.1×10⁶cells/mL)。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案实现：

本发明的第一方面提供了一种无血清昆虫培养基，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括的各组分在无血清培养基中的浓度如下：葡萄糖5-7g/L、蛋白水解物10-16g/L、嘌呤类物质10-20mg/L、PF68 1-3g/L以及细胞生长因子20-50μg/mL。

优选地，所述蛋白水解物为酵母水解物和麦芽水解物的混合物。

优选地，所述嘌呤类物质为腺嘌呤和鸟嘌呤的混合物。

优选地，所述腺嘌呤和鸟嘌呤的混合物在无血清培养基中的浓度为10-20mg/L。

优选地，所述细胞生长因子为重组人表皮细胞生长因子(EGF)、重组人碱性成纤维细胞生长因子(FGF)和重组人胰岛素样生长因子(IGF)中的任意一种或两种以上的组合。