[发明专利]一种基于重组酶的十足目虾虹彩病毒Ⅰ型试纸条型恒温扩增检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于重组酶的十足目虾虹彩病毒Ⅰ型试纸条型恒温扩增检测试剂盒，涉及生物检测技术领域。所述十足目虾虹彩病毒Ⅰ型试纸条型恒温扩增检测试剂盒包括一种引物对和探针组合，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.4‑5所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的试剂盒操作简便，检测时间短，特异性好，灵敏度高，仅需普通恒温设备就可以实现十足目虹彩病毒Ⅰ型的快速检测，适用于基础实验室及虾苗养殖场的现场快速检测，可以有效对十足目虹彩病毒Ⅰ型进行早期监控及日常检测。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别是涉及一种基于重组酶的十足目虾虹彩病毒Ⅰ型试纸条型恒温扩增检测试剂盒。

背景技术

虾类疫病的传统检测方法是PCR(polymerase chain reaction)，但该方法需要专用扩增仪器，不适合基层及现场快速检测。近来，愈来愈多操作简便、检测周期短的分子生物检测技术广泛应用于十足目虹彩病毒Ⅰ型(DIV1)，其中，重组酶聚合酶扩增技术(RPA)发展较为迅速。该技术无需造价高昂的升降温仪器，在恒温条件下10min内即可完成核酸扩增，反应快速而灵敏，扩增产物可以通过构建荧光探针法进行实时定量检测，也可以与DNA芯片、琼脂糖凝胶电泳、侧流层析试纸条等多种检测技术相结合进行检测，适合基层实验室及一线口岸的现场检测。

尹伟力等根据十足目虹彩病毒Ⅰ型的ATP酶基因保守序列设计特异性引物，通过条件优化，建立基于重组酶聚合酶扩增技术的十足目虹彩病毒Ⅰ型检测方法，该方法特异、灵敏，但是需要借助凝胶成像仪观察结果。张徐俞等根据已发表的DIV1的MCP基因保守序列，设计探针和引物，建立了RPA-Cas12a快速检测方法，该方法需要利用荧光定量PCR仪进行扩增。Qian-jun Huang等根据发表的DIV1的MCP基因保守序列，设计探针和引物，建立了RPA快速检测方法，需要荧光定量PCR仪。Tong Guixiang等根据十足目虹彩病毒Ⅰ型的ATP酶基因保守序列设计特异性引物，建立了RPA快速检测方法，该方法需要借助凝胶成像仪观察结果。黄俊等根据MCP基因设计特异性引物和探针，建立RPA快速检测方法，需要用到荧光定量PCR仪。

目前已经公布的基于重组酶的十足目虹彩病毒Ⅰ型检测方法均需借助荧光定量PCR仪或者凝胶成像仪等仪器，不适合基础实验室及虾苗养殖场的现场快速检测。

因此，亟需建立一种操作简便，检测时间短，特异性好，灵敏度高，仅需普通恒温设备的十足目虹彩病毒Ⅰ型检测方法，适用于基础实验室及虾苗养殖场的现场快速检测，从而可以有效对十足目虹彩病毒Ⅰ型进行早期监控及日常检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于重组酶的十足目虾虹彩病毒Ⅰ型试纸条型恒温扩增检测试剂盒，以解决上述现有技术存在的问题，本发明提供的试剂盒操作简便，检测时间短，特异性好，灵敏度高，仅需普通恒温设备就可以实现十足目虹彩病毒Ⅰ型的快速检测。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种检测十足目虾虹彩病毒Ⅰ型的引物对和探针组合，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.4-5所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步地，所述探针的5’端修饰FAM基团，3’端修饰C3Spacer基团，5’端的30bp和31bp碱基由一个THF隔开。

本发明还提供上述的引物对和探针组合在制备十足目虾虹彩病毒Ⅰ型试纸条型恒温扩增检测试剂盒中的应用。

本发明还提供一种十足目虾虹彩病毒Ⅰ型试纸条型恒温扩增检测试剂盒，包括上述的引物对和探针组合。

进一步地，所述十足目虾虹彩病毒Ⅰ型试纸条型恒温扩增检测试剂盒还包括阳性质控质粒。

进一步地，所述阳性质控质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。