[发明专利]苹果休眠芽段超低温保存及复苏活力快速检测方法

权利要求书

1.苹果休眠芽段超低温保存及复苏活力快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)获取休眠枝条；

2)剪成休眠芽段，选取健康休眠枝条的中部条段，剪成带有1个芽，长3～5cm长的节段；

3)对枝条进行干燥处理；

4)将干燥处理后的芽段用热缩管进行密封包装；

5)密封包装后进行降温处理；

6)投入液氮气相中保存；

7)将装有干燥芽段的热缩管从液氮气相中取出，在4℃化冻1天；

8)将化冻处理后的芽段放在湿润的沙土、蛭石或泥炭加蛭石中，于2℃～4℃回湿5～7天；

9)通过TTC染色法进行休眠芽茎尖和休眠芽段形成层染色，最后判断其存活率。

2.根据权利要求1所述的苹果休眠芽段超低温保存及复苏活力快速检测方法，其特征在于，在步骤一中，冬天从田间生长的桑树上剪取带有健康休眠芽的一年生新枝条，其上休眠芽处于深度休眠期，没有被打破休眠。

3.根据权利要求1所述的苹果休眠芽段超低温保存及复苏活力快速检测方法，其特征在于，在步骤三中，将休眠芽段在-2℃～-4℃温度、30～40％湿度条件下，含水量调控至28～47％。

4.根据权利要求1所述的苹果休眠芽段超低温保存及复苏活力快速检测方法，其特征在于，休眠芽茎尖染色具体为：将休眠芽薄片纵切成放入离心管中，加入1.5ml浓度为0.5％的TTC溶液，38℃水浴1h，之后用蒸馏水洗涤3次。将样品放在滤纸上吸去多余水分后，置于高分辨率扫描仪上进行扫描，记录染成红色样本数和染色总样本数，统计TTC染色率。

5.根据权利要求1所述的苹果休眠芽段超低温保存及复苏活力快速检测方法，其特征在于，休眠芽段形成层染色具体为：将休眠芽段薄片直接放入离心管中，加入1.5ml浓度为0.5％的TTC溶液，38℃水浴1h，之后用蒸馏水洗涤3次。将样品放在滤纸上吸去多余水分后，置于高分辨率扫描仪上进行扫描，记录染成红色样本数和染色总样本数，统计TTC染色率。

6.根据权利要求1所述的苹果休眠芽段超低温保存及复苏活力快速检测方法，其特征在于，在步骤五中，将密封包装后的材料置于程序降温仪设备中，以1℃/h速度降至-30℃，后置于-30℃1天。