[发明专利]一种禾谷镰刀菌孢子液的制备方法

说明书

本发明公开了一种禾谷镰刀菌孢子液的制备方法，属于植物保护技术领域。该方法利用玉米秸秆培养基或小麦秸秆培养基，促进禾谷镰刀菌大量产孢，培养5～7天，菌丝体呈红色(赤霉病小麦粒颜色)，过滤菌丝即可得到大量的禾谷镰刀菌孢子液，血球计数板计数后，利用无菌水调整孢子液浓度，即可得到合适浓度的禾谷镰刀菌孢子液。本发明原料易得，成本低廉，操作简单、具有普适性，易于规模化生产，可以获得大量的形态均一的孢子。

技术领域

本发明属于植物保护技术领域，更具体地说，涉及一种禾谷镰刀菌孢子液的制备方法。

背景技术

禾谷镰刀菌是一种广泛分布于全球的植物病原真菌，能侵染麦类作物、水稻、玉米、高粱及多种杂草等。禾谷镰刀菌是引起小麦赤霉病的主要病原菌，患病小麦产量低、品质差，禾谷镰刀菌感染小麦后会产生DON、NIV等毒素，人畜食用受感染的病麦粒会引起头晕、恶心、腹泻等中毒现象。小麦赤霉病的传播通常在我国的长江中下游地区盛行，多在高温、湿润的气候爆发。禾谷镰刀菌以子囊孢子的形态在植物残体种越冬，成为翌春的初侵染源，待气温升高、雨水充沛时，子囊壳形成发育并释放子囊孢子，子囊孢子和分生孢子借助风、雨水、灌溉水等进行传播，在温度、湿度适宜时造成小麦赤霉病大面积爆发，对农业生产、食品安全和人类健康造成严重威胁。在研究小麦赤霉病的病害发生规律，小麦抗性品种的鉴定和小麦赤霉病的防治技术中，利用分生孢子定量接种是不可缺少的手段。

禾谷镰刀菌在多种培养基中均以营养生长为主，不产生分生孢子，而长期保存菌种需频繁转接，容易引起菌种的变异，造成菌源污染。目前，现有的PDA培养基、康乃馨培养基基本不产生分生孢子或产孢量较小、周期长且容易变异。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的技术问题在于提供一种禾谷镰刀菌孢子液的制备方法，利用玉米秸秆培养基或小麦秸秆培养基，促进禾谷镰刀菌大量产孢。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种禾谷镰刀菌孢子液的制备方法：利用玉米秸秆培养基或小麦秸秆培养基培养禾谷镰刀菌，促进禾谷镰刀菌产生大量孢子。

进一步地，所述的小麦秸秆培养基的制备方法为将小麦秸秆洗净，烘干，剪成3cm的小段，称取50g于2000mL的烧杯中加入1100mL纯水，煮至液面下降至1000mL，冷却后过滤定容，即制成小麦秸秆煮沸液母液；将母液按比例稀释分装，无菌封口膜封口后121℃湿热灭菌30min，冷却后加入质量浓度为1％的氯霉素，即得小麦秸秆培养基。

进一步地，所述的玉米秸秆培养基的制备方法为将玉米秸秆洗净，烘干，剪成3cm的小段，称取50g于2000mL的烧杯中加入1100mL纯水，煮至液面下降至1000mL，冷却后过滤定容，即制成玉米秸秆煮沸液母液；将母液按比例稀释分装，无菌封口膜封口后121℃湿热灭菌30min，冷却后加入质量浓度为1％的氯霉素，即得玉米秸秆培养基。

进一步地，所述的小麦秸秆培养基和玉米秸秆培养基的质量浓度为1％-5％。

进一步地，禾谷镰刀菌孢子液的制备方法，具体步骤包括：

1)菌株活化：将禾谷镰刀菌在PDA培养基上，温度26-28℃活化培养3-5天；

2)接种：待菌落长至直径3-5cm时，用无菌打孔器在边缘打孔得到若干直径为3mm的菌饼，利用无菌接种针将菌饼挑取接种到配置好的培养基中，每个培养基中接种2个菌饼；

3)摇床培养：将接种了菌饼的培养基放在摇床上180rpm恒温27℃避光培养7天；

4)过滤菌丝：将各培养基用四层纱布过滤除去菌丝，12000转/分钟离心5min，弃去上清液，再加入适量无菌水用涡旋仪混匀，即得禾谷镰刀菌孢子液。