[发明专利]一种检测CYP11B1基因突变的引物、试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种检测CYP11B1基因突变的引物和方法，其包括扩增CYP11B1基因全外显子序列的引物；采用Sanger测序技术和测序引物。本发明可快速地将CYP11B1基因全外显子的突变检测出来。利用本发明完成的检测结果准确，可以辅助诊断罕见病HALD1和11β‑羟化酶缺陷，对疾病的诊断和治疗有重要的参考意义。

技术领域

本发明属于分子检测领域，特别涉及一种检测CYP11B1基因突变的引物、试剂盒和检测方法。

背景技术

11β-羟化酶缺乏症(11β-OHD)，是一种常染色体隐性遗传疾病。11β-羟化酶属于细胞色素P450酶系统(P45011β)，在人类有两种同功酶，分别由CYP11B1基因和CYP11B2基因编码。根据其临床表现严重程度及酶活性的缺陷程度分为经典型和非经典型11β-羟化酶缺乏症。11β-羟化酶缺陷时，醛固酮和皮质醇合成障碍。而皮质醇生成的减少将导致促肾上腺皮质激素(ACTH)反应性地升高，双侧肾上腺皮质增生。同时，由于该酶功能受累，使得酶的底物及其前体物质积聚，一方面导致向雄激素合成路径分流增加，肾上腺雄激素来源增多；另一方面导致11-去氧皮质醇大量增加。从而形成11β-OHD最主要的两个临床特征：男性化和高血压。

编码11β-羟化酶的基因CYP11B1位于8q24.3，包含9个外显子。该基因长5.4kb，编码503个氨基酸残基，其中包括24个末端氨基酸残基的线粒体信号肽序列，功能上与合成醛固酮(ALD)的CYP11B2基因相似。CYP11B1基因编码的蛋白酶即一般所称的11β-羟化酶，在肾上腺皮质的球状带和束状带均有表达，分别参与球状带中去氧皮质酮(Dec)向皮质酮转换以及束状带中ll-去氧皮质醇向皮质醇转换的过程。近年来该基因已有超过148例突变类型被报道，包括错义突变、无义突变、缺失、插入、剪切、复杂重排等，大多数突变集中在外显子2，6，7，8上。且当突变为剪接突变时，发现该突变明显影响mRNA剪接。

近年来，由于11β-羟化酶缺乏症的发病人数少，所以对其相关研究相对较少。而分子遗传学研究是研究和治疗该疾病的关键。对无或有轻度高血压和明显雄激素过多等临床表现的患者，进行CYP11B1基因突变筛查，有助于进一步明确诊断。同时也为11β羟化酶缺陷症的产前诊断及遗传咨询提供了重要数据。因此本实验采取Sanger测序法对CYP11B1基因的全外显子进行检测，对其突变情况的进行分析和研究，对临床上的11β-羟化酶缺乏症的诊断及治疗，产前诊断及遗传咨询有巨大的参考意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测CYP11B1基因突变的引物、试剂盒和检测方法，采用PCR技术，可用于快速检测患者体内CYP11B1基因的突变情况。

检测CYP11B1基因突变的引物，包括扩增CYP11B1基因的引物，其碱基序列为：

CY-E1-F：TGTAAAACGACGGCCAGT CATGACGTGATCCCTCTCGA

CY-E1-R：AACAGCTATGACCATGCTCCTTCCCCATCTTCCAAA

CY-E2-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GACAGGAGACACTTTGGATTGG

CY-E2-R：AACAGCTATGACCATG GGCAGATGTGCTTTTGGGT

CY-E3-F：TGTAAAACGACGGCCAGT AAGGAGGATGGGATACGGG

CY-E3-R：AACAGCTATGACCATG TGGACGGTGGATTTGAACAT

CY-E4-F：TGTAAAACGACGGCCAGT ACTGAAGGGAGTGTGGGGAG

CY-E4-R：AACAGCTATGACCATG CTGGCAGGAAGGTGAGGAAT