[发明专利]小花山柰提取物的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了提取物制备技术领域的小花山柰提取物的制备方法及其应用，包括以下步骤：S1.小花山柰根状茎提取物的制备，S1‑1：称取500g小花山柰根状茎，将其粉碎后放入1000ml玻璃容器内；S1‑2：向玻璃容器内加入800ml甲醇，在室温下冷浸提取7d后过滤，重复提取3‑5次浓缩得到小花山柰根状茎甲醇提取物；S1‑3：向浓缩后的甲醇提取物内加入500ml水，将提取物与水混匀，混匀后用等体积的石油醚、乙酸乙酯层和正丁醇分别萃取3‑5次，分别浓缩萃取液得石油醚层、乙酸乙酯层和正丁醇层提取物；S2.小花山柰根状茎提取物抗细菌活性的测定；S3.小花山柰根状茎提取物抗真菌活性的测定；S4.小花山柰根状茎提取物的细胞毒活性测定；S5.小花山柰根状茎提取物的高效液相色谱分析。

技术领域

本发明属于提取物制备技术领域，具体是小花山柰提取物的制备方法及其应用。

背景技术

小花山柰又名泰国黑姜、泰国人参、烂姜等，为姜科，山柰属多年生草本植物，原产于缅甸、马来西亚、印度尼西亚的苏门答腊岛和婆罗洲岛等，广泛分布于东南亚热带及亚热带地区。姜科植物作为亚热带植物物种最丰富的类群之一，是姜目中最具特色的一个类群，是具有较高经济价值的林下经济植物。小花山柰作为传统药物具有悠久的应用历史，小花山柰叶中含有的原花青素，可用于食品和化妆品开发；小花山柰根茎含有多种黄酮类物质，具有抗疟原虫和抗真菌的活性；小花山柰的代谢产物被证实具有抗过敏、抗细菌、抗胃溃疡和抗癌细胞等多种对人类有益的生物活性。

杜英，别名假杨梅、梅擦饭、青果、野橄榄、胆八树、橄榄、缘瓣杜英。杜英科杜英属常绿乔木，高可达15米，叶革质，披针形或倒披针形，边缘有小钝齿；叶柄初时有微毛，在结实时变秃净。总状花序多生于叶腋，花序轴纤细，花白色，萼片披针形，花瓣倒卵形，花药顶端无附属物；核果椭圆形，外果皮无毛，内果皮坚骨质，花期6-7月。杜英常绿速生树种，材质好，适应性强，病虫害少。是庭院观赏和四旁绿化的优良品种。

其中，杜英生假隐丛赤壳是近年来引起杜英大量死亡的杜英疫病的主要病原菌，现有技术中，通常使用喷洒农药的方法对杜英生假隐丛赤壳进行抑制，但是，抑制效果并不理想；因此，有必要提出一种小花山柰提取物的制备方法及其应用。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供可以通过小花山柰提取物对杜英生假隐丛赤壳进行抑制的一种小花山柰提取物的制备方法及其应用。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：小花山柰提取物的制备方法及其应用，包括以下步骤：

S1.小花山柰根状茎提取物的制备，制备步骤如下：

S1-1：称取500g洗净晾干的小花山柰根状茎，将其粉碎后放入1000ml玻璃容器内；

S1-2：向玻璃容器内加入800ml甲醇，在室温下冷浸提取7d后过滤，并使用旋转蒸发仪浓缩过滤液，重复提取3-5次浓缩得到小花山柰根状茎甲醇提取物；

S1-3：向浓缩后的甲醇提取物内加入500ml水，将甲醇提取物与水混匀，混匀后用等体积的石油醚萃取3-5次，萃取完全后，再用等体积的乙酸乙酯萃取，最后用等体积的正丁醇萃取，分别浓缩萃取液即得石油醚层、乙酸乙酯层和正丁醇层提取物，4℃冷藏备用；

S2.小花山柰根状茎提取物抗细菌活性的测定；S3.小花山柰根状茎提取物抗真菌活性的测定；S4.小花山柰根状茎提取物的细胞毒性测定；S5.小花山柰根状茎提取物的高效液相色谱分析。

进一步，S2中，小花山柰根状茎提取物抗细菌活性的测定步骤如下：

S2-1.在28℃，黑暗条件下，用LB平板对供试细菌进行活化培养48h，并挑取单菌落；

S2-2.在28℃，150rpm，黑暗条件下，用LB液体培养基摇培24h，将菌液浓度稀释到108cfu·mL^-1备用；