[发明专利]一种EPS-G7的化学合成方法

说明书

本发明提供一种EPS‑G7的化学合成方法，通过将β‑环糊精A乙酰化得到β‑乙酰环糊精B，B在乙酸酐/浓硫酸的混合液中开环，得到链状乙酰化七糖C，使用三氟化硼乙腈将对硝基苯酚与中间体C缩合，得到以α为优势构型的关键中间体p‑硝基苯基(G1)‑O‑乙酰基‑D‑麦芽七糖苷D，D在甲醇钠的作用下，将乙酰基脱除，得到pNP‑G7(p‑硝基苯基(G1)‑D‑麦芽七糖苷)，pNP‑G7在对甲苯磺酸和二甲氧基乙烷的存在下，末端单糖的C4和C6上的羟基之间形成缩醛保护，得到EPS‑G7。本发明方法所用的反应原料廉价易得，实现了α‑淀粉酶检测试剂EPS‑G7的化学合成，是一种简捷、经济、高效的合成方法。

技术领域

本发明属于有机合成技术领域，涉及α-淀粉酶检测试剂的合成方法，具体涉及一种EPS-G7的化学合成方法。

背景技术

α-淀粉酶在人体生理循环中起着关键作用，被用作一些相关疾病的重要指标，如急性胰腺炎、急性有机磷农药中毒、焦虑或抑郁等。

EPS-G7作为α-淀粉酶的底物，是一种体外检测人血清或尿液中α-淀粉酶(AMS)活性的商用检测试剂，具有灵敏度高、抗干扰能力强的优势。EPS-G7的化学名为4,6-二甲氧基乙烷-(G7)-对硝基苯(G1)-α-D-麦芽七糖苷，其分子量为1299.41，是白色或近白色固体粉末，结构式如下。

EPS-G7由对硝基苯(G1)-α-D-麦芽七糖苷(pNP-α-G7)经一步化学修饰得到，因此pNP-α-G7的制备是合成EPS-G7的关键。到目前为止，文献中pNP-α-G7都是通过酶法制备，最常见的方法有两种。第一种是将α-环糊精开环得到麦芽六糖，再与对硝基苯-α-D-葡萄糖苷(pNP-α-G1)在酶的催化下合成pNP-α-G7。第二种是转糖基化法，由pNP-α-G1和麦芽七糖在转移酶催化下制备pNP-α-G7。

化学合成EPS-G7的关键在于pNP-α-G7的α-选择性合成。而目前糖基化反应的方法大多生成β-糖苷，α-糖苷，特别是1,2-顺式-α-糖苷的化学合成较难实现立体选择性，且现有的方法存在底物活化步骤长、底物受限、需要金属催化剂参与等不足。因此，开发新型合成方法实现1,2-顺式-α-糖苷键的构建并应用于EPS-G7的化学合成具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种EPS-G7的化学合成方法，合成路线如下：

具体通过以下步骤实现：

(1)β-环糊精A与醋酐在20-30℃下反应12h，得到β-乙酰环糊精B；

(2)将中间体B溶于乙酸酐/浓硫酸(V/V＝49:1)的混合液中，在40-60℃下反应24h，得到链状乙酰化七糖C；

(3)在缩合试剂存在的条件下，中间体C与对硝基苯酚在0-40℃反应1-9h，得到以α为优势构型的关键中间体p-硝基苯基(G1)-O-乙酰基-D-麦芽七糖苷D；

(4)关键中间体D与甲醇钠在20-30℃下反应24-48h，得到pNP-α-G7(p-硝基苯基(G1)-D-麦芽七糖苷)；

(5)pNP-α-G7在对甲苯磺酸和二甲氧基乙烷的存在下，在55℃反应24h，得到EPS-G7(4,6-亚乙基-(G7)-p-硝基苯基(G1)-α-D-麦芽七糖苷)。

其中，步骤(3)中的缩合试剂可以为三氟化硼乙腈、三氟化硼乙醚或四氯化锡等，优选三氟化硼乙腈。

步骤(3)中的缩合试剂用量可以为1-4当量，优选3当量。

步骤(3)中的反应溶剂可以为二氯甲烷、乙腈、甲苯或1,2-二氯乙烷等，优选二氯甲烷。

步骤(3)中的反应温度可以为0-40℃，优选25-30℃。