[发明专利]用于预防猫鼻气管炎、猫杯状病毒病、猫泛白细胞减少症的三联mRNA疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种猫鼻气管炎、猫杯状病毒病、猫泛白细胞减少症的三联mRNA疫苗其制备方法。该三联mRNA疫苗由表达猫疱疹病毒gB蛋白的mRNA，表达猫疱疹病毒gD蛋白的mRNA，表达猫杯状病毒VP1蛋白的mRNA和表达猫细小病毒VP2蛋白的mRNA结合脂质体包裹方案混合后制备mRNA疫苗，并应用于猫鼻气管炎、猫杯状病毒病、猫泛白细胞减少症的预防免疫。所得三联mRNA疫苗能够有效激活特异性抗体，并且简化了接种程序，能达到一次免疫接种可同时预防和控制猫鼻气管炎、猫杯状病毒病、猫泛白细胞减少症的目的。

技术领域

本发明涉及核酸疫苗领域，具体而言涉及一种用于预防猫鼻气管炎、猫杯状病毒病、猫泛白细胞减少症的三联mRNA疫苗及其制备方法。

背景技术

猫病毒性鼻气管炎(FVRs)，又称猫传染性鼻气管炎，是由猫疱疹病毒(Felineherpesvirus，FHV)感染引起猫的一种急性、高度接触性传染病。FHV感染的典型临床症状是体温升高、打喷嚏、咳嗽、角膜结膜炎、鼻眼浆液性或脓性分泌物和眼周皮肤溃疡。在幼猫和成年猫中均可发生，主要感染2-4个月龄，发病率高达100％，成年猫不引起死亡，幼猫死亡率可达50％，是目前已知最严重的猫呼吸道疾病之一。FHV的gB蛋白是由UL27基因编码的949个氨基酸组成的囊膜糖蛋白，是FHV囊膜表面的重要组成部分，同时gB糖蛋白也是最主要的免疫抗原性蛋白，对于病毒入侵细胞、病毒复制、细胞融合以及在细胞间传播起着决定性作用。FHV的gD蛋白是病毒囊膜的主要成分，存在于感染的细胞膜上，具有高度的保守性和抗原性，能够与细胞表面的分子特异性结合。诱导机体产生细胞免疫和体液免疫，在病毒穿入易感细胞中起重要作用，是宿主细胞免疫和体液免疫反应的主要靶细胞之一。gB蛋白和gD蛋白也是极为保守的免疫原性蛋白，作为研究疱疹病毒亚单位疫苗常选择的靶蛋白，具有较好的免疫原性。

猫杯状病毒病(Felinecaliciviral disease，FCVD)是由猫杯状病毒(FelineCalicivirus，FCV)引起的一种以上呼吸道感染为主要症状的疾病，该病主要侵害7-84日龄幼猫，常发于56-84日龄，1岁以下的猫最易感，日龄越小的猫感染后死亡率越高，潜伏期2-3日，自然病程7-10日。其主要临床症状表现为口腔溃疡、肺炎、慢性胃炎、关节炎及跛行等。FCV的VP1蛋白是一种结构蛋白，在病毒粒子的形成、抗原决定以及病毒-宿主细胞的相互作用中起到关键作用。VP1拥有大部分中和抗体表位，是重点研究对象。

猫泛白细胞减少症(feline panleukopenia，FP)是由猫细小病毒(Felineparvovirus，FPV)引起的猫的一种急性、高度接触性传染病。FPV感染的典型临床症状是双相热、呕吐、腹泻、脱水，循环障碍及白细胞严重减少和出血性肠炎。主要感染1岁以内的幼猫，通常情况下，对1岁以下的猫的致死率为50％～60％，对5月龄以下的幼猫的死亡率高达80％～90％。FPV的VP2蛋白约占所有结构蛋白的90％，VP1蛋白占所有结构蛋白的10％，因此VP2蛋白是FPV编码的主要的抗原蛋白，在免疫应答、识别受体及感染组织的过程中发挥着重要作用。VP2蛋白上有多个抗原识别位点，能够刺激机体产生中和抗体，起到自我保护作用。

研究并开发用于预防猫鼻气管炎、猫杯状病毒病、猫泛白细胞减少症的mRNA疫苗，对于猫主要疫病的防控具有积极的意义。相比传统疫苗，mRNA疫苗作为新型疫苗的形式，具有生产工艺简单、开发速度快、无需细胞培养、成本低。相较与DNA疫苗，mRNA疫苗无需进入细胞核，没有整合至宿主基因组的风险，半衰期可以通过修饰进行调整。mRNA疫苗可提供对适应性和先天免疫力的综合刺激，即原位抗原表达和危险信号传递；可以诱导“平衡”免疫反应，包括体液和细胞效应因子以及免疫记忆。临床上，猫的上述三种疾病交叉混合感染较多，通常还继发细菌感染，症状更加复杂。相关技术中，尚缺乏针对上述三种病毒的三联mRNA疫苗，一旦感染发病，常采用对症治疗或施用抗生素的方式进行治疗，但治疗效果和治疗特异性较差，而且普遍存在耐药性和毒副作用。

发明内容

本发明提供了一种用于预防猫鼻气管炎、猫杯状病毒病、猫泛白细胞减少症的三联mRNA疫苗及其制备方法。