[发明专利]用于预防猫鼻气管炎、猫杯状病毒病、猫泛白细胞减少症的三联mRNA疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种用于预防猫鼻气管炎、猫杯状病毒病和猫泛白细胞减少症的三联mRNA疫苗，其特征在于，所述的三联mRNA疫苗包含有表达抗原蛋白的mRNA，其中表达抗原蛋白的mRNA包含有表达猫疱疹病毒gB蛋白的mRNA、表达猫疱疹病毒gD蛋白的mRNA、表达猫杯状病毒VP1蛋白的mRNA和表达猫细小病毒VP2蛋白的mRNA；

表达猫疱疹病毒gB蛋白的mRNA序列如SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.9所示，表达猫疱疹病毒gD蛋白的mRNA序列如SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.10所示，表达猫杯状病毒VP1蛋白的mRNA序列如SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.11所示，表达猫细小病毒VP2蛋白的mRNA序列如SEQ IDNO.8或SEQ ID NO.12所示。

2.如权利要求1所述的三联mRNA疫苗，其特征在于，编码猫疱疹病毒gB蛋白的基因为缺失3’端第2440-2847位核苷酸序列，编码猫疱疹病毒gD蛋白的基因为缺失3’端第988-1125位核苷酸序列，编码猫杯状病毒VP1蛋白的基因为缺失5’端第4-372位核苷酸序列。

3.如权利要求2所述的三联mRNA疫苗，其特征在于，编码猫疱疹病毒gB蛋白的基因是密码子优化后的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码猫疱疹病毒gD蛋白的基因是密码子优化后的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；编码猫杯状病毒VP1蛋白的基因是密码子优化后的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；编码猫细小病毒VP2蛋白的基因是密码子优化后的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.如权利要求1所述的三联mRNA疫苗，其特征在于，表达猫疱疹病毒gB蛋白的mRNA、表达猫疱疹病毒gD蛋白的mRNA、表达猫杯状病毒VP1蛋白的mRNA和表达猫细小病毒VP2蛋白的mRNA的质量比为2∶2∶3∶3。

5.如权利要求1所述的三联mRNA疫苗，其特征在于，所述的三联mRNA疫苗还含有佐剂，所述的佐剂包括脂质纳米颗粒佐剂、水包油佐剂、聚合物和水佐剂、油包水佐剂、氢氧化铝佐剂或维生素E佐剂。

6.如权利要求5所述的三联mRNA疫苗，其特征在于，所述的佐剂为阳离子脂质、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、聚乙二醇脂质和胆固醇，摩尔比为50∶10∶38.5∶1.5。

7.如权利要求1所述的三联mRNA疫苗，其特征在于，所述的三联mRNA疫苗为肌内、皮内或皮下给药的剂型。

8.一种制备权利要求1～7任一所述的三联mRNA疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)构建表达抗原蛋白mRNA的合成质粒，使用限制性内切酶进行线性化处理，得到线性化的抗原蛋白mRNA的合成质粒；

(2)对线性化的抗原蛋白mRNA的合成质粒利用T7启动子序列进行体外转录反应，提纯获得表达抗原蛋白的mRNA；

(3)对步骤(2)中获得的表达抗原蛋白的mRNA使用牛痘病毒加帽酶和2'-O-甲基转移酶通过酶法进行Cap加帽修饰反应，提纯获得加帽修饰的表达抗原蛋白mRNA；

(4)将步骤(3)中加帽修饰的表达抗原蛋白mRNA与阳离子脂质、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、胆固醇、聚乙二醇脂质混合，获得所述的三联mRNA疫苗。

9.权利要求1～7任一所述的三联mRNA疫苗在制备同时预防猫鼻气管炎、猫杯状病毒病和猫泛白细胞减少症药物中的应用。