[发明专利]一种芋螺毒素外泌体及其应用

说明书

本发明公开了一种芋螺毒素外泌体及其应用。芋螺毒素CONOT‑25的氨基酸序列如SE Q ID NO.1所示。本发明从芋螺基因组中分离得到了一个新型芋螺毒素，且提供了一种效率更高，提取外泌体纯度更高的技术。同时，临床试验显示，新型芋螺毒素的外泌体具有较好的除皱效果，显示了在美容除皱领域中的巨大应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物和细胞生物技术领域，具体涉及一种芋螺毒素外泌体及其应用。

背景技术

芋螺(Cone Snail)，又名“鸡心螺，”主要生长于热带海域，属软体动物门，腹足纲，芋螺科，是一种利用毒素捕食猎物的肉食性动物。芋螺具有相当丰富的种类，目前，全球已知的芋螺种类约有900多种，而在我国发现的芋螺种类约有100多种，主要分布在广东、广西、西沙群岛、海南岛及台湾海域。

芋螺毒素(conotoxin)是由芋螺毒液管和毒囊内壁的毒腺分泌得到的，每种芋螺的毒液中含有50-200个活性多肽，芋螺毒素具有很强的特异性，因此，不同的芋螺所含的芋螺毒素种类各有不同。据现有资料显示，每一种芋螺都有超过100种不同的芋螺毒素，因此理论上自然界中会有超过90000种天然的芋螺毒素，这是一个十分庞大的自然资源库，具有十分广阔的研究前景。芋螺毒素大多数由12～40个氨基酸组成，富含二硫键，包含了迄今为止最小的神经毒素。每个芋螺毒素均由单一的mRNA编码，其原始翻译产物是一种特定的前蛋白原前体化合物，由高度保守的信号肽序列、中间前体段和成熟毒素段三部分组成。根据芋螺毒素二硫键框架和高度保守的信号肽序列，可以将芋螺毒素分为若干个超家族，如A，M，O，P，I，S，T，I，V，Y，J等14个超家族，根据同一超家族中作用靶位的不同又可以将芋螺毒素进行进一步细分，如分为α、ω、μ、δ、κ、ψ等类型。

而外泌体(exosome)是由细胞分泌的纳米级球形脂质双层外囊泡，携带核酸、蛋白质、脂质等生物活性物质，可作为细胞间通讯和物质交换的介质在机体的生理和病理过程中发挥作用。外泌体蛋白组分主要分为两类，一类是公共组分，它们参与囊泡形成和分泌的过程，即外泌体无处不在，包括膜转运和融合相关蛋白，热休克蛋白，四跨膜蛋白超家族等；另一类是特异性组分，其与其前体细胞密切相关，即具有细胞特异性，如来自抗原呈递细胞的CD45和MHC-II。与其他合成载体相比，外泌体的内源性和异质性使其在疾病诊断和治疗领域具有广泛而独特的优势。然而，外泌体的储存稳定性低、低回收率、低纯度和弱靶向性限制了其临床应用。

发明内容：

本发明从芋螺基因组和多肽组中分离鉴定了一个91个氨基酸的多肽，具有XXII半胱氨酸框架，属E超家族，是一种新型芋螺毒素，命名为CONOT-25。

本发明的第一个目的是提供一种新型芋螺毒素CONOT-25，其氨基酸序列为：Met-Met-Thr-Arg-Val-Phe-Val-Met-Phe-Phe-Leu-Leu-Val-Leu-Thr-Glu-Gly-Trp-Pro-Arg-Leu-Thr-Asp-Ser-Asp-Cys-Arg-Arg-Gly-Pro-Asn-Met-His-Ile-Thr-Cys-Phe-Lys-Asp-Gln-Ser-Cys-Gly-Leu-Ile-Val-Lys-Arg-Asn-Gly-Arg-Leu-Ser-Cys-Thr-Leu-Asn-Cys-Lys-Cys-Arg-Arg-Asn-Glu-Ser-Cys-Leu-Pr o-Ser-Glu-Glu-Val-Asp-Trp-Asp-His-Arg-Asp-Met-Lys-Ile-Val-Ile-Cys-Pro-Lys-Pro-Cys-Gln-Glu(SEQ ID NO.1)。

本发明的第二个目的是提供一种上述的芋螺毒素CONOT-25的编码基因。

本发明的第三个目的是提供一种重组表达载体，含有上述的编码基因。

优选，所述重组表达载体的原始表达载体为pc-DNA5/FRT/TO。

本发明的第四个目的是提供一种基因工程细胞，其为整合有上述的编码基因或转化有上述的重组表达载体的细胞。