[发明专利]一种用于膀胱癌的诊断或辅助诊断的试剂及检测试剂盒

说明书

本发明属于生物医学领域，更具体地，涉及一种用于膀胱癌诊断或辅助诊断的试剂及检测试剂盒。本发明提供的膀胱癌检测试剂盒，通过检测特定分子标记物目标区域的甲基化水平，可有效区分膀胱癌患者和健康人，其诊断非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)患者尿液样本的灵敏度可达75％，其诊断肌层浸润性膀胱癌(MIBC)患者尿液样本的灵敏度可达93.75％，其检测泌尿系统良性疾病患者尿液样本的特异性为88.33％，其检测健康人尿液样本的特异性为100％。

技术领域

本发明属于生物医学领域，更具体地，涉及一种用于膀胱癌的诊断或辅助诊断的试剂及检测试剂盒。

背景技术

膀胱癌是来源于膀胱壁上皮组织和间质组织的恶性肿瘤，其主要组织类型包括尿路上皮癌、鳞状细胞癌和腺细胞癌，其中尿路上皮癌是最常见的组织类型，占所有膀胱癌的90％以上。作为泌尿系统肿瘤中发病率最高的恶性肿瘤之一，膀胱癌的发病率在全球所有恶性肿瘤中居于第九位，其在中国男性恶性肿瘤中居于第七位。与往年相比，中国的膀胱癌总体发病率呈现出上升的趋势。初次确诊的患者中约有75％为非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)，可经尿道膀胱肿瘤电切术治疗，而确诊的肌层浸润性膀胱癌(MIBC)患者则需进行全膀胱切除术、尿流改道术及其他辅助治疗。膀胱癌的复发率很高，其术后复查、复发治疗的医疗费用巨大，这使其成为治疗费用最高的肿瘤。如果能对膀胱癌患者进行早期诊断和早期治疗，则能显著改善患者预后，使其5年生存率达到90％以上。

目前膀胱癌的诊断以膀胱镜检查和尿液脱落细胞学检查为主。膀胱镜检查的过程为：将膀胱内窥镜经尿道插入膀胱，医师通过肉眼观察，发现形态可疑的病变并用活检钳夹取组织样本以便于病理分析。虽然膀胱镜检查及病理活检是诊断膀胱癌的金标准，但是其作为一项有创操作，可能会造成患者尿道、膀胱黏膜的破损和出血、尿路感染等病症，且检查过程十分痛苦，患者依从性不高。尿液脱落细胞学检查是无创的，且诊断特异性较高，但是其诊断低级别膀胱癌的灵敏度低于20％，其诊断灵敏度有待提高。其它一些基于尿液标记物的检测，如核基质蛋白22(Nuclear matrix protein 22，NMP22)、膀胱肿瘤抗原(Bladder tumor antigen，BTA)等，虽然具有一定的诊断学价值，但是其易出现假阳性结果，不能良好区分泌尿系统良性疾病患者和膀胱癌患者。因而，仍然需要无创的、高灵敏度、高特异性的标记物用于膀胱癌的早期诊断和辅助诊断。

DNA甲基化主要是指DNA中的胞嘧啶碱基在甲基转移酶的作用下，以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，在其第5位碳原子上共价结合一个甲基基团的过程。DNA甲基化模式的改变与癌症的发生和发展密切相关，癌细胞展现出两种不同的甲基化模式，如癌细胞中某些基因CpG岛的甲基化水平显著提高，而全基因组DNA甲基化水平则降低。现有技术认为一些甲基化分子标记物能够一定程度区分膀胱癌患者或非膀胱癌受试者，但是这些甲基化分子标记物诊断早期膀胱癌的灵敏度、及其诊断干扰样本和膀胱癌阴性样本的特异性仍然有待验证，且需要进一步提高，以达到无创诊断的目的。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种用于膀胱癌的诊断或辅助诊断的试剂及检测试剂盒，以解决现有技术对于膀胱癌诊断的有创性、灵敏度低(尤其是早期膀胱癌诊断灵敏度低)、易出现假阳性结果、准确度低等的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种用于膀胱癌诊断或辅助诊断的试剂，包括用于检测生物样本中目标区域甲基化水平的试剂，所述目标区域选自如下至少一种区域中的全长区域或部分区域：区域1、区域2和区域3；

以GRCh38为参考基因组，所述区域1选自Chr2:70888818-70889103负链，区域2选自Chr5:135038904-135039319正链，区域3选自Chr7:156616479-156616686负链。

优选地，所述部分区域包括如下至少一种所述区域的子区域：